仪器分析实验讲义201111.doc

PAGE  PAGE 15 目 录 实验一 取代基电效应对芳烃吸收带的影响及导数光谱的测绘 实验二 紫外分光光度法测定苯甲酸钠的含量（标准曲线法） 实验三 柱色谱法测定氧化铝的活度 实验四 纸色谱法分离分析有机酸 实验五 薄层色谱法分离分析混合染料 实验六 高效液相色谱定性分析 实验七 气相色谱法定性分析 实验八 高效液相色谱法定量分析（外标法一点法） 实验九 固体样品红外透射光谱的测定 实验十 气相色谱法测定乙酸乙酯中苯的含量（内标两点法） 实验一 取代基电效应对芳烃吸收带的影响 一、目的要求 通过测定几种典型的发色基团取代苯和助色基团取代苯的E2吸收带及B吸收带，掌握取代基的共轭效应和诱导效应对吸收带波长影响的规律，及它们在结构分析中的应用。 二、原理 取代基对芳烃吸收带的影响与取代基结构、取代基个数、位置有关。研究取代基对芳烃吸收带的影响规律，对确定有机化合物结构具有重要的作用。 对于发色团取代的苯，由于含有键的发色团(、、等)与苯相连时，共轭，产生更大的共轭体系，E2带(＞104)红移，在200～250nm范围出现；同时B吸收带也产生较大红移。若取代基是含有n电子的发色团，分子除了可以发生跃迁之外，还可能发生跃迁，谱图中还会出现低强度的R吸收带。 对于助色团取代苯，由于含有未成键电子对的助色团(-OH,-OR,-NH2,-NR2，-X等)与苯相连时，产生共轭，使E2带、B带均红移；B带吸收强度增大，精细结构消失。 三、仪器与试剂 （1）仪器：紫外分光光度计。 （2）试剂：浓度为5.0×10-3 mol/L的苯/乙醇溶液；6.0×10-5 mol/L的苯甲酸/乙醇溶液；5.0×10-4 mol/L的苯胺/乙醇溶液；1mol/L 的HCl/乙醇溶液；无水乙醇。 四、实验步骤 1．用1cm吸收池，以无水乙醇为参比，分别测定苯、苯甲酸、苯胺的乙醇溶液在波长200~340nm区域内的紫外吸收光谱。 2．用1cm吸收池，以无水乙醇为参比，测定苯胺的紫外吸收光谱，在苯胺中加入1滴1mol/L HCl/乙醇溶液，再次测定紫外吸收光谱，进行比较。 五、数据处理 1．分别测定苯、苯甲酸的E2吸收带的、，同时观察B吸收带的位置，比较发色团对芳烃吸收带的影响。 2．比较苯胺与苯胺盐B吸收带波长与强度的变化。 3．根据取代基电效应对以上实验结果作出正确的解释。 六、问题讨论 1．对上述实验中所列的化合物，如果采用不同极性的溶剂进行测定，吸收带将会有什么变化？ 2．从苯胺及其盐的紫外吸收带的变化，给你什么启示？有何实际应用价值？ 实验二 紫外分光光度法测定苯甲酸钠的含量 （标准曲线法） 一、目的 1．掌握紫外分光光度计定量操作方法。 2．掌握标准曲线法定量计算方法。 二、提要 标准曲线法定量分析，即用已知量的标准物质，配制一系列浓度的标准溶液，在相同的条件下进行测定，以仪器的响应值（UV-Vis法中为吸光度A）为纵坐标，标准溶液的浓度为横坐标绘制标准曲线。利用此曲线或它的回归方程，可以计算样品溶液中该组分的含量。 式中a与b分别为标准曲线的截距与斜率。 苯甲酸钠的紫外吸收光谱在229nm处有最大吸收。制备系列浓度的苯甲酸钠标准溶液，以229nm为检测波长，测定其吸光度，计算回归方程；可测定苯甲酸钠样品溶液中苯甲酸钠的含量。 三、仪器与试剂 紫外分光光度计； 苯甲酸钠/0.04MHCl储备液（100μg /ml）；0.04mol/L HCl水溶液；样品溶液 三、方法 1 检测波长的选择 以0.04mol/L HCl溶液为参比溶液，于紫外－可见分光光度计上测定苯甲酸钠标准溶液的吸收光谱（200~320nm），确定苯甲酸钠含量测定的测定波长（λ 229nm）。 2苯甲酸钠标准曲线的绘制 配制浓度为2、4、6、8、10 μg/ml苯甲酸钠/0.04MHCl溶液。以0.04mol/L HCl溶液为参比溶液，测定系列浓度的苯甲酸钠/0.04M HCl溶液在229nm处的吸光度，计算其回归方程。 3 测定 以0.04mol/L HCl溶液为参比溶液，测定样品溶液的吸光度值( n=3 )，根据回归方程计算样品溶液中苯甲酸钠的含量（，RSD%）。 四、思考题 1．制备标准曲线的目的是什么？ 2．为什么要用/0.04MHCl溶液为参比溶液进行测定？ 实验三 柱色谱法测定氧化铝的活度 一、目的 熟悉用柱色谱测定氧化铝活度的方法；了解吸附柱层析的一般操作方法。 二、提要 1．氧化铝的吸附能力等级测定方法较常用的为Brockmann法，观察对多种偶氮染料的吸附情况衡量氧化铝的活度。所采用的染料按吸附性（极性）递增的排列顺序为：偶氮苯（1号）对甲氧基偶氮苯（2号）苏丹黄（3号）苏丹红（4号）对氨基偶氮苯（5号）对羟基偶氮