双向电泳原理与流程选编.ppt

;Proteomics;Proteomics;Proteome Analysis and Proteomics;Why 2DE?;理论 pI and Mr 图 酵母细胞表达6,216种蛋白;2D 电泳优越性;蛋白质组学应用举例;寻找差异蛋白质;Life Sciences 的历史;GE Healthcare milestones in 2-D electrophoresis;;Image analysis; 小鼠肝脏蛋白提取物2D凝胶电泳;2D/MS 经典工作流程;样品制备 ;2D/MS 经典工作流程;Principle of 2-D Electrophoresis;等电聚焦电泳原理; 等电聚焦（IEF）电泳就是在凝胶中加入两性电解质，从而构成从正极到负极pH逐渐增加的pH梯度，处在其中的蛋白分子在电场的作用下运动，最后各自停留在其等电点的位置上，测出蛋白分子聚焦位置的pH值，便可以得到它的等电点。;双向电泳：传统方法;使用载体两性电解质IEF时存在的问题;固相凝胶 (支持膜上0.5 mm 厚凝胶);Immobiline? 干胶条的特性;新pH范围的 Immobiline 干胶条;不同pH范围胶条;宽pH 、窄 pH 范围胶条;提高分辨率: 斑点显现;不同长度的胶条;线形与非线形胶条;pH 3-10 L and NL;The IPGphor? Platform;IPG 胶条 水化;IPG strip rehydration;加样品到胶条槽;泡涨盘 VS 聚焦盘;干胶条的水化;在样品杯中加入少量不含样品的水化液检查是否漏液。上样前吸走水化液。 上样前将样品离心去掉不溶物，每个样品杯最多可加样150μl。 盖上胶条槽的盖子，再盖IPGphor 仪器的盖子。;IEF电泳;IPG 胶条的平衡——两步平衡;第二向垂直电泳系统;Push the IPG Strip Down onto the Gel Surface;Seal the Cassette and Fix the IPG Strip with Agarose;Inserting the Cassette;SDS参数;SE600ruby;Ettan DALTsix;Ettan DALTtwelve system;第二向系统;2D/MS 经典工作流程;Protein Detection Methods;Coomassie? Blue-考马斯亮蓝染色; 胶体考马斯亮蓝染色;银染;Silver stained gel of E. coli Lysate ;2D/MS 经典工作流程;ImageScanner III图像扫描系统; 由SIB, GeneBio和GE Healthcare合作开发，为SwissProt推荐分析软件。 高效能参数自动找点，全自动蛋白定量计算方法，不受背景影响。 在原始数据上进行分析，结果可靠。界面窗口可随意设计，界面极其友好。 全自动凝胶匹配，采用先进的算法。根据点的相关因素、形状、位置、周围情况， 胶间匹配效率高。 多种统计学分析工具，快速找到胶间蛋白表达差异。 可直接链接到ExPASy? 和 SwissProt? 数据库，进行网上检索。 全部操作过程都可以撤销/重作操作，每一步骤都附有说明，使用方便。 全面支持DIGE技术，源自DeCyder 2D软件。 ;ImageMaster Platinum 7.0 软件分析流程;2D/MS 经典工作流程;;自动斑点切取——Spot picker;MALDI-ToF 质谱分析;经典 2D 工作流: 产品范围 ;Thank you!