2016现代组织化学技术-组织化学.pptx

现代组织化学技术 华中科技大学同济医学院 解剖学系组织胚胎学教研室 李宏莲 ;1. 什么是组织化学与细胞化学技术？;2. 组织化学与细胞化学技术的特点;组织原位，特异性的化学反应，显微镜观察 ——对组织或者细胞内特定物质进行定性，定位， 定量分析 ;3. 组织化学与细胞化学技术的主要类型;4. 组织化学与细胞化学技术的基本要求;;;二、标本的制备;二、标本的制备;二、标本的制备;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;+;;;;;;;;;;;3. 酶组织化学技术;;;;;;5. 凝集素组织化学技术 原理及特点： --- 凝集素 (lectin)是一种无免疫原性蛋白质，具有凝集红细胞的特性，故又称植物血凝素 --- 能识别糖蛋白与糖多肽中的碳水化合物，特异性地与糖蛋白中的糖基反应，凝集素亲和层析已成为近年分离纯化糖蛋白的重要手段 --- 凝集素具有多价结合能力，能与多种标记物结合，可作为组织化学的特异性探针在光镜或电镜水平显示其结合部位，广泛用于糖蛋白的性质、分布以及正常细胞更新过程中糖蛋白变化的研究 凝集素的标记物： --- 荧光素，辣根过氧化物酶、铁蛋白、胶体金、生物素等 --- 已有上述标记物标记的商品出售，应用时可直接购买;5. 凝集素组织化学技术 荧光素标记凝集素的组织化学： 用荧光素标记凝集素 染色程序： 组织切片经脱蜡处理，冰冻切片直接进入下一步；若是Bouin液固定的组织，用70％乙醇洗3次去除组织切片内的黄色后，再用蒸馏水漂洗； PBS漂洗(含1％牛血清白蛋白)2次，每次5min； 加入FITC-凝集素 (PBS适当稀释)，置湿盒内孵育，室温l h； PBS漂洗3次，每次5min； 水溶性封片剂封片，荧光显微镜观察。 结果：FITC标记的凝集素能直接与组织细胞内的糖基结合，从而显示糖基的位置，可用于检测组织细胞中的糖成分，阳性部位呈黄绿色荧光