分子生物技术在蜜蜂遗传和育种研究上的应用.docVIP

分子生物技术在蜜蜂遗传和育种 研究上的应用 摘 要：随着分子生物学研究的不断发展，用蜜蜂为素材进行遗传学、进化学基础理论的研究已越来越多，本文综述了分子杂交技术、PCR技术、RFLP技术、RAPD技术、微卫星DNA技术、线粒体DNA技、DNA指纹技术等分子生物技术所进行的蜜蜂遗传和育种研究现状。为今后蜜蜂分子生物学领域开展的研究提供参考。 关键词：蜜蜂；遗传；育种；生物技术 1 分子生物技术 分子生物技术就是通过蛋白质、核酸在分子水平上的研究，掌握其性质，利用其性质在分子结构水平上操作从而达到人们对生物的改造获得人们所需要的产物。主要的分子生物技术有已知序列的HYPERLINK /doc/6976806.html基因合成、未知序列的全基因的合成、HYPERLINK /doc/5607785.htmlsouthern杂交、HYPERLINK /doc/5607785.htmlnorthern杂交等技术。分子生物技术主要用于HYPERLINK /doc/5643457.html重组蛋白的生产、HYPERLINK /doc/6977627.html基因改造物种、HYPERLINK /doc/5441445.html基因治疗、基因改造及刑事案件的断定、环境保护等。它是以细胞融合技术和基因重组技术为基础，通过对生物体自身的一些特性和功能的研究，从新设计和构建出一个具有人为干涉的新物种或是新品系，再结合一些工程原理来进行相互生产和加工，从而为我们提供附加商品和服务的综合性技术体系。 所以我们也经常把分子生物技术称作生物工程，这也是标志着现代生物技术的主要研究方向。分子生物学技术已经成为研究动物病害的一个重要手段，对于我国蜜蜂养殖业高效和可持续发展也有着十分重要的影响。现在对于蜜蜂方向的研究早已进入分子方向，分子生物技术已被越来越多地应用到蜜蜂遗传和育种研究中,本文综述了分子杂交技术、PCR技术、RFLP技术、RAPD技术、微卫星DNA技术、线粒体DNA技、DNA指纹技术等分子生物技术所进行的蜜蜂遗传和育种研究现状。 2 分子生物技术在蜜蜂遗传和育种上的应用 2.1 分子杂交技术 互???的核苷酸序列通过Walson-Crick碱基配对形成稳定的杂合双链分子DNA分子的过程称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。分子杂交是基因工程和分子生物学的重要技术之一，主要包括Southern印迹法、Northern印迹法以及Western印迹法，它们的杂交受体分别是DNA片段、RNA片段和蛋白质。DNA的分子杂交是双链DNA的变性和带有互补序列的同源单链间的配对过程。通过分子杂交技术可以克隆一些新基因并研究同源基因之间遗传进化上的差异。 较典型的事例是：蜜蜂胞质延伸因子EF-1α基因的发现。科学家利用果蝇EF-1α类基因序列作为探针，对经内切酶消化的蜜蜂基因组DNA进行杂交，结果克隆到了1.0Kb和1.1Kb的两个片断。它们和果蝇的EF-1α基因序列同源性高达77%，并且含有两个内含子，类似于果蝇的EF-1αF2基因（在果蝇中它是由两个独立的基因F1和F2编码的）。因此，推断蜜蜂的EF-1α基因是从一个F2类型而非F1类型的祖先进化而来的。 2.2 聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）技术 多聚酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）技术是在 HYPERLINK /doc/789545.html \t /doc/_blank 模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依赖于 HYPERLINK /doc/2978381.html \t /doc/_blank DNA聚合酶的酶促合成反应。 HYPERLINK /doc/2978381.html \t /doc/_blank DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。在适宜的温度和环境下，DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3′-OH末端，并以此为起始点，沿模板5′→3′方向延伸，合成一条新的DNA互补链。多聚酶链式反应是八十年代发展起来的新技术，它通过模拟体内DNA复制的方式在体外选择性地扩增DNA某个特殊区域。 在蜜蜂学的研究中较典型的事例是：利用蜜蜂的微卫星片段（微卫星序列是由大量CT GT AC短串联重复序列构成的DNA片段，在不同个体间的变异频率很高）进行群体变异、新基因的分离分析和蜂王交尾频率的研究。