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苯基-琼脂糖凝胶 6FF使用说明.pdf

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苯基-琼脂糖凝胶 6FF使用说明

苯基-琼脂糖凝胶 6FF 使用说明 货号: S8831 规格:25mL 保存:产品应密封贮存在 4℃~30℃(保存溶液为 20% 乙醇+0.1M 醋酸钠),通风、干燥、清 洁的地方。不能冷冻。用过的柱子贮存在 4℃(20% 乙醇)。保质期 5 年。 产品说明: 苯基-琼脂糖凝胶 6FF 是将苯基键合在 6FF 琼脂糖微球上形成的一种可利用疏水相互作用来 实现目标产品纯化分离的疏水类介质。用于生物大分子和乙肝疫苗的纯化分离。本品为白色 球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。 理化指标 项 目 指 标 配基 R-OCH2-CH(OH)-CH2-O-C6H5 基质 6% 交联琼脂糖 形状 球形 粒径 45~165 μm 蛋白质吸附容量(HSA) 36mg/ml(高);24mg/ml(低) 最高流速(25℃) 100KPa 下 200 cm/h* 耐压 0.2 MPa 工作温度 4~40℃ pH 适用范围 2~14(短时间 ,在位清洗);3~13(长时间) 以下溶液中稳定: 化学稳定性 1mol/L NaOH;70% EtOH;30%异丙醇;0.5%SDS; 6mol/L 盐酸胍;8mol/L 尿素;3 mol/L(NH4)2SO4 *柱子:柱子:内径 16mm、柱长 10cm,柱床高 5cm,25℃,流动相为 0.1mol/LNaCl。 使用说明: 1. 装柱 (1)让所有的材料和试剂达到室温。配制初始缓冲液(平衡液)和洗脱缓冲液。 (2)根据柱子大小取所需量的凝胶,清洗掉 20%乙醇,抽干,用初始缓冲液(按凝胶:缓 冲液=3:1 的比例)配成匀浆。 (3)将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位(液面略高于滤膜),务必使底 端无气泡。 (4)用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内,注意勿使产生气泡。打开柱子出液口, 使凝胶在柱内自由沉降,连结好柱子顶端柱头。 (5)打开蠕动泵,让缓冲液用使用时流速的 1.33 倍的流速流过,使柱床稳定。用 2~3 柱体 积的缓冲液平衡柱子。 2. 平衡 让平衡缓冲液以一定流速流过柱子,到流出液电导和 pH 不变。平衡缓冲液一般是高盐浓度 的缓冲液,如 0.02~0.05mol/L 的 PBS 加 1~2.5mol/L(NH4)2SO4 等。 3. 上样 (1)样品用平衡液配制,浑浊的样品要离心和过滤后上样。 (2)一般情况是让目标产品结合在柱子上,用平衡液洗去杂质,再选择一种洗脱液洗下目 标产品。 (3)介质对样品组分吸附的程度取决于样品的疏水性质、流动相的离子强度和温度。盐浓 度大、温度高或样品组分疏水性强,介质对组分吸附牢。 4. 洗脱 疏水介质可用减小盐浓度进行洗脱。加表面活性剂或有机溶剂可加强洗脱。最常用的洗脱液 是低盐浓度缓冲液,如 0.02~0.05mol/L 的 PBS。 5. 再生

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