实验五线粒体的分离和观察.pptVIP

实验五 线粒体的分离与观察;一、实验目的 1.对分离得到的线粒体进行活性鉴定。 2.掌握用差速离心技术分离制备线粒体的方法。 ;二、实验原理;;;;;中性红-詹纳斯绿染色;离心技术概述;离心力g＝1.11×10-5n2r r为离心机中轴到离心管远端的距离 n为离心机每分钟的转速（r/min） 1000g=9.8牛（N）;离心技术类型;（一）差速离心（differential centrifugation）;;（二）密度梯度离心（density gradient centrifugation） ?;;;三、实验材料、用品 1.器材： 剪刀，漏斗，研钵，纱布，离心管，显微镜，冷冻高速离心机等。 2. 材料： 玉米黄化苗;四、玉米线粒体及细胞核的分离 从植物细胞分离线粒体，除了作线粒体功能研究外，在植物细胞遗传工程中，常用于分离核外基因――线粒体DNA等目的。 分离线粒体的方法仍采用均匀介质中的差数离心。介质中0.25mol/L蔗糖也可以用0.3mol/L甘露醇代替。EDTA螯合二价阳离子，Ca2+除去后细胞间粘着解体，促使组织分散成单个细胞。牛血清白蛋白（BSA）能包在细胞外面，并作为竞争性底物削弱蛋白酶的作用。;1.试剂 1）分离介质：0.25mol/L蔗糖，50mmol/L的 Tris-HCl缓冲液（pH7.4），3