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2017-04-19 发布于北京
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4.免疫组化技术—理论篇

免疫组织化学（理论篇）(immunohistochemistry);免疫组化的标记物 ;免疫组化的标记物 ;免疫组化的标记物;免疫组化的标记物 ;免疫组化标记物;免疫组化的检测系统;石蜡切片标本的处理：组织离体后尽快固定，切开固定效果好，固定液以10％福尔马林缓冲液为佳，固定时间在4h-24h之间，长时间固定会影响抗原决定簇的暴露，产生阴性结果。 ; 标本的取材厚度以2mm为宜，梯度酒精脱水尽量彻底充分，二甲苯透明时间不宜长，1～3h为佳，透明过度会导致组织发硬发脆。浸蜡应选择低熔点的石蜡，浸蜡应充分。 ; 切片通常以3～4um的厚度为宜,太厚易掉片，细胞重叠，对细胞膜阳性结果观察不理想。裱片要求达到无皱折、无气泡，水温宜在（48～50℃），玻片用APES或多聚赖氨酸处理，以增强粘附性。80 ℃烘烤1～2h。;冰冻切片的处理：冰冻切片的组织抗原保存好，缺点是不易做出好的冰冻切片，易出现冰晶、细胞肿胀等现象。通常以5um的厚度为佳，冷风吹干后用纯丙酮固定2遍,干燥置入4 ℃冰箱短期保存，－20℃冰箱长期干燥保存。; 石蜡切片应用3％的新鲜H2O2进行封闭，以阻断内源性过氧化物酶的活性，室温下孵育10min。 ;热抗原修复的缓冲液; PAP笔画圈时应在组织外围2mm左右，不宜太靠近组织。滴加抗体时应从外周环绕，不直接滴加在组织中间，易浪费抗体。缓冲液中加入适量的乳化剂，可使抗体均匀弥散，节省抗体，如Triton X-100等。