生物工艺学第4章生物工艺过程中的无菌技术.pptVIP

生 物 工 艺 学; 目　　录; 第四章 生物工艺过程中的无菌技术 ; 采取措施对生产过程涉及到的原料、设备等进行灭菌处理，达到严格的纯种培养条件。通常工业上采取的主要措施是： (1)对培养基进行灭菌处理； (2)对好氧过程的空气进行灭菌处理； (3)对生物反应器(发酵罐)及其连接管道进行灭菌处理； (4)菌种为无污染的纯粹种子； (5)使生物反应器处于正压环境； (6)对培养过程中补料进行灭菌处理等。;4.2.1 干热灭菌 ;干热灭菌时，微生物主要由于氧化作用而死亡。最常用的方法有以下两种： (1)灼烧法。常用于实验室接种针、勺、试管或三角瓶口和棉塞的灭菌，也用于工业发酵罐接种时的火环保护。 (2)烘箱热空气法。将物品放入烘箱内，然后升温至150～170℃，维持1～2小时。经过烘箱热空气法可以达到彻底灭菌的目的。该法适用于玻璃、陶瓷和金属物品的灭菌。其优点是???菌后物品干燥，缺点是操作所需时间长，易损坏物品，对液体样品不适用。 ;利用饱和蒸汽进行灭菌的方法称为湿热灭菌。通常湿热灭菌条件为121℃，维持30min。 高压蒸汽灭菌是实验室、发酵工业生产中最常用的灭菌方法。一般培养基、玻璃器皿、无菌水、缓冲液、金属用具等都可以采用此法灭菌。;射线灭菌是利用紫外线、高能电磁波或放射性物质产生的高能粒子进行灭菌的方法，其中以紫外线最常用。其杀菌作用主要是因为导致DNA胸腺嘧啶间形成胸腺嘧啶二聚体和胞嘧啶水合物，抑制DNA正常复制。此外，空气在紫外线辐射下产生的臭氧有一定杀菌作用。 ;某些化学试剂能与微生物发生反应而具有杀菌作用。常用的化学药剂有酒精、甲醛、漂白粉(或次氯酸钠)、高锰酸钾、环氧乙烷、季铵盐等。由于化学药剂也会与培养基中的一些成分作用，且加入培养基后易残留在培养基内，所以，化学药剂不能用于培养基的灭菌，一般应用于发酵工厂环境的消毒。;过滤除菌是利用过滤法阻留微生物以达到除菌的目的。此法仅适用于不耐高温的液体培养基组分和空气的过滤除菌。工业上常用过滤法大量制备无菌空气，供好氧微生物的液体深层发酵使用。;4.3.1 湿热灭菌原理 ;4.3.1.1 微生物热阻;在一定温度下，微生物受热致死遵循分子反应速率理论，微生物受热死亡的速率－dN/dt在任何瞬间与残留的活菌数N成正比，这就是对数残留定律，其数学表达式为 式中：N—残留活菌数，个； t—受热时间，min； k—比死亡速率常数，s-1。k也称灭菌速率常数，此常数大小与微生物种类及灭菌温度有关； dN/dt—活菌数瞬时变化速率，即死亡速率。;在实际过程中某些微生物受热死亡的速率是不符合对数残留规律的。将其N0/Nt对灭菌时间t在半对数坐标中标绘得到的残留曲线不是直线。呈现这种热死亡非对数动力学行为的主要是一些微生物芽孢。有关这一类热死亡动力学的行为，虽然可用多种模型来描述，但其中以Prokop和Hunphey所提出的“菌体循序死亡模型”最有代表性，其假设耐热性微生物芽孢的死亡不是突然的，而是渐变的，即耐热性芽孢(R型)先转变为对热敏感的中间态芽孢(S型)，然后转变成死亡的芽孢(D型)，这一过程可用下式表示 NR—耐热性活芽孢数(R型)；NS—敏感性活芽孢数(S型)； ND—死亡的芽孢数(D型)； ;当培养基受热温度从T1上升至T2时，微生物的比死亡速率常数k和培养基成分分解破坏的速率常数k’变化情况为 ☆对微生物的死亡情况而言 将上述两式相除并取对数后可得 ☆ 培养基成分的破坏，同样也可得 两式相除得 ;4.3.1.4 灭菌温度和时间的选择;不同成分的培养基其含菌量是不同的。培养基中微生物数量越多，达到无菌要求所需的灭菌时间也越长。天然基质培养基，特别是营养丰富或变质的原料中含菌量远比化工原料的含菌量多，因此，灭菌时间要适当延长。含芽孢杆菌多的培养基，要适当提高灭菌温度并延长灭菌时间。 ;4.3.2 分批灭菌 ;4.3.2 分批灭菌 ;分批灭菌操作： 发酵罐上一般装有空气管道，取样用的取样管道，放料用的出料管道，接种管道，消泡管道，补料管道，调节pH用的酸碱管道以及控制培养温度用的降温水管道。降温水管是与夹套或蛇管连接，与发酵罐内部不相通。 ;培养基的连续灭菌就是将配好的培养基在向发酵罐等培养装置输送的同时进行加热、保温和冷却的灭菌过程。;连续灭菌的基本设备一般包括： ①配料预热罐，将配好的料液预热到60～70℃，以避免灭菌时由于料液与蒸汽温度相差过大而产生水汽撞击声； ②连消塔，连消塔的作用主要是使高温蒸汽与料液迅速接触混合，并使料液