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基礎化学实验IV(仪器分析实验)
基础化学实验IV(仪器分析实验);实验技能训练要点; 一、实验目的
二、高效液相色谱法简介
三、实验原理
四、实验步骤
五、结果处理
六、思考题
七、实验延伸;掌握高效液相色谱法的基本原理
熟悉高效液相色谱仪各主要部件及其作用
熟悉高效液相色谱仪的使用方法
掌握进样阀的工作原理和进样操作
掌握内标法; 色谱法起源;刘志广 分析化学及实验
;色谱法分类;反相HPLC
极性:固定相 流动相
固定相 - 极性弱
流动相(甲醇, 乙腈等)- 极性强
极性小物质后出峰;高效液相色谱(HPLC); 高效液相色谱(HPLC);;;刘志广 分析化学及实验
; 泵体材料耐酸、耐碱、耐化学腐蚀
耐压30 ~ 60MPa,能连续工作
输出流量稳定,重复性佳
输出流量范围宽,对填充柱:0.1 ~ 100mL/min
有恒流泵和恒压泵 ;手动进样器-六通阀/定量环;色谱柱;检测器; 紫外检测器: 应用最广,对大部分有机化合物有响应。
特点:
灵敏度高;线形范围高;
流通池可做的很小(1mm × 10mm ,容积 8μL);
对流动相的流速和温度变化不敏感;
波长可选,易于操作; 可用于梯度洗脱。;色谱工作站;;药物方面;内标法;葛根素具有较强的非极性,用反相液相色谱法分析
葛根素在250 nm具有最大吸收峰,采用紫外检测器检测; 已知化合物
纯度高、量准确
性质类似,如同系物
充分分离;定量校正因子计算;1. 溶液配制; 准确移取上述标准溶液1.00 mL于10 mL容量瓶中,加1.00 mL内标液,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即为0.05 mg/mL的标准溶液。
样品溶液
取2.00 mL葛根素注射液于500 mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀
准确吸取上述溶液2.00 mL及1.00 mL内标液于10 mL容量瓶,用甲醇稀释至刻度,摇匀。 ;2. 色谱条件和测定方法;注意事项; 确定样品中各组分的出峰顺序; 1. 什么是归一化法、内标法和外标法?三种方法的优缺点各是什么?
2. 绝对和相对校正因子的物理意义是什么?推导本次实验的计算公式。
3. 查阅一篇有关HPLC的综述文献。;七、实验延伸;参考文献
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