BrdU染色原理及步骤.ppt

BrdU染色原理和步骤;BrdU染色原理;活体注射或细胞培养后利用抗Brdu单克隆抗体，ICC染色，显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物，双重染色，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研究细胞动力学有重要意义。因组织细胞内无内源性Brdu存在，所以Brdu应用较广 掺入双链DNA内的Brdu，以氢链与腺嘌呤结合，不能直接与抗Brdu抗体反应，需经解链使Brdu暴露方能被染色。常用的解链方法为盐酸加热、蛋白酶处理等，使DNA双链部分单链化，抗Brdu小鼠单克隆抗体与增殖细胞核内的Brdu结合，再经酶标抗小鼠IgG抗体孵育、呈色，显示进入S期细胞的情况。 ;改进和发展;操作步骤 （1）;（5）经固定的玻片空气干燥，0.3％H2O2 -甲醇 30 min灭活内源性氧化酶。 （6）5％正常兔血清封闭。 （7）甲酰胺100℃，5 min变性核酸。 （8）冰浴冷却后PBS洗涤，加1抗即抗小鼠BrdU单抗（工作浓度1：50），阴性??照加PBS或血清。 （9）按ABC法进行检测，苏木素或伊红衬染，在显微镜下随机计数10个高倍视野中细胞总数及BrdU阳性细胞数，计算标记指数（LI）。 ;BrdU staining protocol;Method;注意事项;BrdU染色的进化---EdU;;谢谢观看