猪瘟病毒快速诊断试纸条的研制.docxVIP

猪瘟病毒快速诊断试纸条的研制 房大学 摘要：以胶体金标记兔抗猪瘟IgG，以抗猪瘟E0单克隆抗体为检测线，羊抗兔作为质控线组装检验猪瘟病毒的快速诊断试纸条，用试纸条检验猪瘟活疫苗呈阳性，检验猪乙脑活疫苗、猪大肠杆菌、PBS成阴性；与ELISA试剂盒相对照，试纸条具有良好的相关性，敏感性也较高，具有较好的临床应用价值。 关键词：胶体金；猪瘟；抗原；试纸条； Abstract: To mark the colloidal gold of rabbit-anti-swine fever IgG, To anti E0 monoclonal antibodies for test line , the sheep-anti-rabbit as qc inspection swine fever virus assembly line rapid diagnosis strip, with the dipsticks test positive for developing the swine fever, inspection pig epidemic encephalitis B, pigs E. coli, PBS into negative; And ELISA kit contrast, dipsticks has good correlation, and higher sensitivity, and has a good clinical application value. Key words: colloidal gold; swine fever; antigen; Rapid Diagnosis Strip 猪瘟是由猪瘟病毒（CSFV）引起的猪的一种急性、接触性、危害严重的烈性传染病[1]，其临床特征为发病猪高热稽留和小血管的变性导致组织器官多发性出血、坏死和梗死。当前猪瘟在我国发病还很普遍，其发病状况呈多样性，典型猪瘟与非典型猪瘟共存，持续感染与隐性感染共存，免疫耐受与带毒综合征共存，给猪瘟的免疫预防和控制本病的发生带来困难。 对猪瘟的检测目前有兔体交互免疫试验、间接血凝试验(IHA)、荧光抗体试验(FA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和反转录聚合酶链式反应(RT—PCR)等。以上实验室诊断方法不同程度地存在费时、费用高、操作复杂、需要特殊仪器和试验结果不能长期保存等缺点[2]。 本研究应用胶体金标记技术研制检测猪瘟抗原的快速诊断试纸, 可为临床提供一种操作简单、特异性高、敏感性好和快速的检测工具,为猪瘟的快速检测提供了新的方法。 1材料与方法 材料 1.1.1试剂　兔抗猪瘟IgG，本实验室制备，经辛酸法纯化；抗猪瘟EO蛋白单克隆抗体，韩国JENO BIOTECH；氯金酸，柠檬酸三钠等均为常规分析纯试剂，购自国药试剂。 1.1.2耗材 硝酸纤维素膜（Millipore）、玻璃纤维素膜、胶版、吸水纸等上海金标公司产品。 1.1.3设备 XYZ三维划膜喷金仪 HM3030，切条机等上海金标公司产品 1.2 方法 1.2.1 胶体金的制备 取0.01%氯金酸水溶液100mL,置微波炉高火加热3min至沸，搅动下迅速加入1%柠檬酸三钠2.25mL，摇匀继续煮沸3min，氯金酸变为红色，取出，冷却后以去离子水恢复到原体积，密封保存。 1.2.2 胶体金标记兔抗猪瘟IgG 胶体金标记抗体最适pH值的测定 取9个试管，每个试管加入的胶体金为1mL，第1～7管pH值(0.1M 碳酸钾)分别为7.5、7.8、8.1、8.4、8.7、9.0、9.3，兔抗猪瘟IgG的量为40μg/mL,第8、9管分别为NaCl、空白对照，pH值为制备时的pH；将IgG与胶体金混合均匀后，室温静置15min，每管加入0.1mL10%氯化钠，混匀在室温静置2h以上观察结果，与对照管9颜色较一致的试管的pH即为胶体金标记抗体最适pH。 表1 胶体金标记抗体最适pH值的测定 项目管号123456789胶体金pH值7.57.88.18.48.79.09.3对照对照蛋白质(mL)0.10.10.10.10.10.10.10010％NaCl（mL）0.10.10.10.10.10.10.10.10 胶体金标记抗体最低标记量的测定 将胶体金调至最适pH值，稀释兔抗猪瘟IgG（由100μg/mL～500μg/mL，另设对照管），各取0.1mL按顺序加入一系列装有1mL胶体金的试管内，混匀后静置15min，在上述各管内加入0.1mL10%NaCl溶液,混匀后静置2h，与对照管11颜色较一致的试管的蛋白量即为胶体金标记抗体最小蛋白量，详见表2。 表3 胶体金标记抗体