爱爱医资源—免疫胶乳浊度分析在自动生化分析仪上的应用.pptVIP

免疫胶乳浊度分析 在自动生化分析仪上的应用;免疫比浊回顾 免疫胶乳浊度分析（immunolatex turbidimetry） 在生化分析仪上进行测定的有关问题;免疫比浊;免疫比浊技术是在免疫沉淀反应（Precipitation）检测法的基础上建立的。 最早应用的免疫沉淀反应是Ouchterlony在1948年建立的琼脂双向扩散法。 1965年Mancini等和Fahey等分别建立了可以定量的单向（辐射状）免疫扩散技术。 Laurell等1966年建立了电免疫扩散法，使报告结果的时间由单向免疫扩散法的≥24h缩短到4-5h。 ;经典的免疫沉淀试验通常是在抗原与相应抗体反应的终点判定结果，存在费时、操作繁琐、敏感度低（10～100mg/L）、不能自动化等缺陷。 根据沉淀反应时，抗原抗体结合后可使反应系统透光度发生改变，建立了以测定透光度为特征的微量免疫沉淀测定法法，既免疫浊度测定技术。 ;1967年由Richie首次报告，20世纪70年代???步完善，80年代初期初步应用临床常规检查。 抗原抗体在液相（特殊的缓冲液）中快速结合，形成抗原抗体复合物，反应液出现浊度。 ;液相中抗原与抗体的反应结果与两者的浓度比例有关。抗原或抗体显著过量时，都只能生成少量的可溶性免疫复合物，分子极小，不适于免疫比浊法检测。 免疫比浊技术要求溶液中抗体要保持中等过量，此时免疫复合物（immunecomplex，IC）仍是可溶性的。 在这种情况下，抗原与抗体的反应遵循质量作用定律（Ag+Ab＝Ag.Ab），形成IC的量是抗原或抗体的函数。 当抗体固定时，IC的量与抗原的量成正比。 ;*;目前，国内开展的各项免疫检验，均求使用国家食品药品监督管理局（SFDA）准入和批准的仪器和试剂。这样做不仅能使各项检查更加统一，规范，各实验室之间检查结果更具可比性，而且也可避免很多不必要的医疗纠纷。 免疫比浊技术中散射比浊法目前均用获国家食品药品监督管理局（SFDA）批准进口的自动化分析仪器和配套的各种检测项目的专用试剂。 透射比浊法（生化分析仪）可用国产试剂。 ;散射比浊 专用仪器 专用配套试剂 原装进口试剂昂贵 ;目前，由于技术的发展，两种比浊法的灵敏度和特异性已接近，而全自动生化仪的自动化程度和精密度要胜于专用散射比浊仪，透射免疫比浊法在临床上的应用日益广泛。生化分析仪通过免疫比浊法技术，架起了现代生化检验和现代免疫技术的桥梁。 免疫化学是免疫学技术和生物化学技术的结合。既具有免疫学抗原抗体结合的特异性，又具有生物化学反应动力学特点。;透射免疫比浊;透射免疫比浊;比浊法中，少量的小的抗原抗体复合物极难形成浊度，除非放置较长时间；如形成较大的复合物，则抗原和抗体用量也较大，显然不符合微量化的要求。 为解决快速反应及微量化的要求，建立了免疫胶乳浊度法（immunolatex turbidimetry）。;其基本原理是： 将特异性抗体吸附在大小适中、均匀一致的胶乳颗粒上，当遇到相应抗原时，则使胶乳颗粒发生凝集。 单个胶乳颗粒在入射光波之内，不阻碍光线透过；两个或两个以上胶乳颗粒凝聚时则使透过光减少。 免疫微球凝聚的程度为被测物浓度的函数，由此可测出标本中待测物的含量。;*;该技术的关键在于两个方面： 首先是选择适用的胶乳，其大小（直径）要稍小于波长。用500nm波长者，选择100nm颗粒较适合；用585nm波长者，则选用100～200nm颗粒为好。目前多用200nm的胶乳颗粒。 其次，胶乳与抗体结合时用化学交联虽好，但失活也较严重；一般用吸附法即可。;*;胶乳颗粒多为惰性微球和羧基化微球 氨基化高分子纳米微球 氨基化纳米微球的颗粒大小较传统的微球更小（约0.1μm），它与抗体的结合是通过其表面的氨基与抗体的氨基端共价结合，在微球与抗体之间有一个桥联化学臂，降低了位阻效应，不仅提高了抗体的结合率，而且还为抗体提供合适的三维空间立体结构，有效地保护了抗体与抗原结合的活性区域。 与采用惰性纳米微球的传统技术相比，检测的灵敏度得到了极大的改善，最高可达到1.0ng/ml。;（1）操作简单，可在几分钟内快速、准确地检测血清蛋白含量，真实反映病情进展和评估治疗效果，对于疾病的早期诊断和治疗具有重要的临床意义； （2）不易受人为操作和外界因素干扰，检测稳定性和重复性都很好； （3）能利用普通的生化分析仪进行检测，容易实现自动化，可在各级基层医疗机构普及和应用。 ;胶乳比浊分析 颗粒增强透射免疫比浊法 （particle-enhanced turbidimetric immunoassay, PETIA） 胶乳增强免疫浊度测定 （Latex enhanced turbidimetric immunoassay , LETIA ） 粒子强化免疫浊度测定 ;*;心血管