色谱法详案..docVIP

教 案（详案） 课程名称： 生物药物分析 课程性质： 专业必修课 适用专业（方向）：生物制药专业 总学时：36学时 使用教材：生物药物分析 开课单位：生命科学与技术学院 授课教师：谭承佳（助教） 授课班级：生物制药05级3班 开课时间：2007-2008学年上 课程生物药物分析班级生命科学04级1-2班学期2006-2007-1课时2学时教师谭承佳上课日期每周4第3.4节课程类型理 论课程名称 （章、节）第七章 色谱法色谱法概述教学目的、要求使同学了解纸色谱、薄层色谱、高效液相色谱、气相色谱在生物药物分析中的应用和含量测定方法教学重点薄层色谱、高效液相色谱的基本原理及操作教学难点薄层色谱、高效液相色谱的基本原理及操作技术主要教?? 设备材料投影仪、电脑、常规教学设备。思考题1 概念： 色谱法 2 色谱法的基本原理？教 学 过 程 安 排引入复习： 1 生物药物的概念 （提问） 同学们好，在进入新内容的学习之前，我们先来回顾一下前面的内容，在绪论里我们已经了解了生物药物分析的基本任务是鉴别各种生物药物的化学成分、化学结构、测试样品质量、多组分药物的组分含量、相关物质和降解产物含量等。生物药物主要包括蛋白质、氨基酸和多肽、酶类以及多糖、甾体类，对这类药物的分析除常规方法外还需具专属性的，我们在前几章已经学习了酶法、酶联免疫法以及电泳法等特殊分析方法，今天我们将学习药物分析中应用广泛的色谱法。（教师讲授） 引入：色谱法及其色谱法原理在日常生活中的应用？ （提问）2min《生物药物分析》授课教案 授 课 内 容 概述： 一 色谱法的由来及其概念 （教师讲授） 1903年俄国植物学家Tsweet将碳酸钙装填在玻璃管(也称为色谱柱，Column)内，石油醚洗脱，用于分离植物叶子中的叶绿素，植物叶子的提取液在通过柱子后，在柱床上出现了不同颜色的色带，因此他将这种方法命名为色谱法(Chromatography)。这就是最早使用的柱色谱法。 色谱法（chromatography）利用物质的物理化学性质建立起来的分离、分析方法。广泛用于复杂化合物的分离分析。实质：分离；目的：定性或定量分析 二 色谱法的发展（教师讲授） 30、40年代相继有了薄层色谱法和纸色谱法。 1942年瑞典科学家Tiselins因电泳和吸附分析的研究获诺尔奖金。 50年代英国生物化学家Martin在研究液液分配色谱的基础上建立了气相色谱法并且提出了色谱分离的塔板理论，Martin由于对气相色谱法的贡献获得诺贝尔奖金。 60年代后期出现了高效液相色谱法。 70年代末发展了气相色谱-质谱联用技术、液相色谱-质谱联用技术。 色谱法经历了近百年的发展已经由分离向分离、分析的，色谱法在药物分析领域占有重要地位，已成为我国药物分析论文中使用频率最高的一种分析方法，在质量标准中的应用也迅速增加。 三 色谱法的原理（示意图）（教师讲授） A+B+C C C B C B A C B A A B C 流动相 基于组分通过互不相溶的两相而达到分离：样品溶解在流动相(Mobile Phase)中，从装填在柱子中或涂渍在载体表面的固定相(Stationary Phase)上通过，依据组分与固定相之间的相互作用力的不同，经过充分的运行时间，即被分离。色谱法是一种分离技术，这种分离技术应用于分析化学中，就是色谱分析。 四 色谱法分类 色谱法种类很多，通常按以下几种方式分类。 1．按两相状态分类 在Tswett的实验中，碳酸钙是固定不动的，称为固定相；石油醚是流动的，称为流动相。根据流动相状态，流动相是气体的，称为气相色谱法；流动相是液体的，称为液相色谱法。若流动相为超临界流体，则称为超临界流体色谱法。 根据固定相状态，是活性固体（吸附剂）还是不挥发液体或在操作温度下呈液体（此液体称固定液，它预先固定在一种载体上），气相色谱法又可分为气固色谱法和气液色谱法；同理，液相色谱法也可分为液固色谱和液液色谱法。 2. 按分离原理分类 色谱法中，固定相的性质对分离起着决定性的作用。 根据不同组分在固定液中溶解度的大小而分离的称为分配色谱。气相色谱法中的气液色谱和液相色谱法中的液液色谱均属于分配色谱。 根据不同组分在吸附剂上的吸附和解吸能力的大小而分离的称为吸附色谱。气相色谱法中的气固色谱和液相色谱法中的液固色谱均属于吸附色谱。 3. 按固定相的形式分类 固定相在柱内的称为柱色谱，柱色谱有填充柱色谱和开管柱色谱。固定相填充满玻璃或金属管中的称为填充柱色谱；固定相固定在管内壁的称为开管柱色谱或毛细管柱色谱。 固定相呈平面状的称为平板色