河北医科大学开题报告例文.doc

PAGE  — PAGE 5 — 河 北 医 科 大 学 研究生开题报告书 学科、专业＿＿ 外科学＿＿＿ 攻读学位＿ 科学学位＿＿＿ 研究生姓名 ＿＿ ＿＿＿ 学 号＿＿＿ 导师姓名＿＿＿ ＿ ＿ 研究方向＿＿＿骨外科学＿＿＿ 所在院(所)＿ ＿＿ 课题名称：ESW对破骨细胞和骨髓间充质干细胞转录因子及细胞因子的影响 一、目的、意义及国内外研究现状（限800字） 骨质疏松症及其所诱发的骨折是严重危害中老年人健康的疾病。根据世界卫生组织的定义，骨质疏松症是一种以骨量减少、骨组织微结构破坏、骨骼脆性增加和易发生骨折为特征的全身性疾病。目前，中国已迈入老龄社会，随着人均寿命的延长和老年人口比例的增加，骨质疏松症的发病率逐年提升，已成为继高血压、糖尿病之后的第三大老年性疾病。 成骨细胞骨形成和破骨细胞骨吸收的失衡以及MSCs向成骨细胞分化减少、向脂肪细胞分化增加是造成骨质疏松的病因。骨转换由成骨细胞生成新骨质和破骨细胞吸收骨质两部分构成，人30岁以后，骨生成逐渐少于骨吸收，两者之间的平衡被打破。破骨细胞来源于单核/巨噬细胞谱系，通过多个其单核的祖细胞融合而成，是唯一具有骨吸收功能的细胞，它的活动受到体内激素、细胞因子、生长因子、力学刺激等众多因素的影响 。 而目前临床治疗骨质疏松症及促进骨质疏松性骨折愈合的方法，多为药物治疗，缺乏有关力学刺激疗法。各种药物均存在着使用不方便，作用不明显，用药时间长，副作用多，经济负担重等问题。因此，寻找一种有效的生物力学刺激，作用于对力学刺激敏感的骨骼系统，来预防和治疗骨质疏松症及其骨折，成为当前的研究热点。 破骨细胞来源于单核/巨噬细胞谱系，通过多个其单核的祖细胞融合而成，是唯一具有骨吸收功能的细胞，它的活动受到体内激素、细胞因子、生长因子、力学刺激等众多因素的影响(6)。 体外冲击波(ESW)作为一种生物物理学刺激，它蕴涵的巨大能量经相应仪器的二次聚焦形成高能量冲击波作用于治疗部位。上世纪80年代Graff等在动物实验中发??ESW具有促进骨折愈合的成骨作用。ESW是通过各种物理效应作用于治疗部位而产生生物学效应，促进细胞增殖与代谢，刺激微血管再生和增强组织修复能力。冲击波能将有效的生物力学刺激作用于易于发生骨折的区域，达到促进骨生成，增加骨密度，预防和治疗骨质疏松的目的。Olav P.等证明非聚焦式体外冲击波对大鼠骨量减少和骨质疏松症有良好的疗效。 ESW对破骨细胞的作用国内外鲜见报道，本研究拟通过ESW干预卵巢切除(ovariectomized, OVX)后骨质疏松大鼠动物模型，应用流式细胞术观察其骨髓腔内间充质干细胞增殖和分化活性的变化；并应用ESW干预体外培养的OVX动物模型中分离的破骨细胞和MSCs，通过RT-PCR，方法检测在破骨细胞和MSCs增殖、分化过程中起关键作用的RANKL/RANK/ OPG/Runx2/PPARγ等转录因子和细胞因子表达水平，应用流式细胞术、电子显微镜观察等方法测定破骨细胞和MSCs的活性，研究骨质疏松破骨细胞的活性、骨质疏松MSCs成脂或成骨分化的方向及其分子机理、转录因子及细胞因子表达；为揭示ESW治疗骨质疏松症的机理提供依据，进而为临床应用ESWT防治骨质疏松提供理论依据，促进这一新技术的推广应用。 二、主要研究内容(拟采用的技术路线、研究进展、经费预算及实验室所具备的条件等) 技术路线及研究进展 （1）破骨细胞，骨髓间充质干细胞的来源及制备。 1.选取2010年09月至2012年2月我院骨科门诊骨质疏松症患者志愿者120例，签署知情同意书。入选标准包括：全部患者符合以下标准: (1) 有自发性腰痛和(或)负重性疼痛；(2) 应用双能量X 线骨密度仪行髋部检查，骨密度少于或等于同性别正常健康30～35 岁组的BMD 2个标准差；(3) 排除甲旁亢、多发性骨髓瘤、长期应用糖皮质激素等所致继发性骨质疏松症；(4) 近3 个月未使用影响骨代谢药物，如维生素D、雌激素、钙制剂、二磷酸盐等；(5) 无严重心、肝、肾等重要脏器病变。 2.抽取120例志愿者骨髓，在中国科学院高能物理研究所实验室分离破骨细胞以及骨髓间充质干细胞供试验用。 (2)ESW对体外培养的人破骨细胞的影响。 已有大量研究表明ESW具有促进MSCs成骨的作用，而其对破骨细胞的影响未见报道，对此我们的前期初步研究已证实ESW具有抑制正常破骨细胞的作用。而骨质疏松患者破骨细胞活性与正常破骨细胞有差别，我们拟用不同能流密度和频率的ESW对体外培养的人破骨细胞进行干预，以正常破骨细胞和非ESW干预破骨细胞作为对照，研究ESW对破骨细胞融合指数抑制率、破骨细胞凋亡率、