甘草酸二铵原料药-质量研究资料10.docVIP

 NUMPAGES 16 NUMPAGES 16 PAGE  PAGE 16 PAGE 1 10、质量研究工作的试验资料及文献资料 一、样品 本公司试制的甘草酸二铵原料药三批：批号为。批量分别为804g，799g，802g。 二、含量限度 按干燥品计算，含C42H68N2O16应为97.0%～103.0%。 三、性状 本品为应白色结晶性粉末；无臭，味甜 取本品三批检查，结果见表1。 表1 甘草酸二铵外观检查结果 批号性状白色结晶性粉末；无臭，味甜白色结晶性粉末；无臭，味甜白色结晶性粉末；无臭，味甜本品三批均符合规定。 溶解度：本品在水中易溶，在乙醇中极微溶解，在氯仿或乙醚中几乎不溶。依法检查（中国药典2000年版二部凡例），检查结果见表2。 表2 甘草酸二铵溶解度检查结果 溶剂样品量（g）溶解情况结论水0.98176在1ml中未全溶，在10ml中溶解溶解乙醇0.01019在10ml中未全溶，在100ml中溶解极微溶解氯仿0.00917在100ml中未全溶几乎不溶乙醚0.01023在100ml中未全溶几乎不溶本品三批均符合规定。 四、鉴别 1. 取本品约0.5g，加稀盐酸4ml与水6ml，煮沸10分钟，放冷，滤过，滤液备用。取沉淀用水洗涤至中性，105℃ 干燥1小时，加乙醇10ml使溶解，取乙醇溶液1ml，加10%2，6-二叔丁基对苯甲酚乙醇溶液0.5ml和20%氢氧化钠溶液1ml，至水浴上加热30分钟，液面应出现紫红色悬浮物。本品三批均呈正反应。 2. 取鉴别（1）项下的滤液1ml，加间苯二酚10ml和盐酸5滴,煮沸1分钟，放冷，加苯3ml，振摇，苯层即显紫红色。本品三批均呈正反应。 3. 取含量测定项下的溶液，照分光光度法（中国药典2000年版二部附录Ⅵ A）测定，在252nm的波长处于最大吸收。本品三批均符合规定。 4. 取本品约50mg，加水5ml使溶解，显铵盐的鉴别反应（中国药典2000年版二部附录Ⅲ）。本品三批均呈正反应。 五、检查 1. 有关物质 1.1 方法 照高效液相色谱法（中国药典2000年二部附录Ⅴ D）??定 色谱条件及系统适用性 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.02mol/L磷酸溶液（用三乙胺调节pH值至6.5）-乙腈（75：25）为流动相；检测波长为252nm。理论板数按甘草酸二铵峰计算应不低于1500。甘草酸二铵峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。 测定法 取本品适量，精密称定，用流动相溶解并稀释制成每1ml中约含0.2mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加流动相制成每1ml中约含2μg的溶液，作为对照溶液。取对照溶液10μl注入液相色谱仪进行预试，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为记录仪满量程的20%～25%；再取供试品溶液10μl注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的2倍，供试品溶液的色谱图中如显杂质峰，量取各杂质峰面积的总和不得大于对照溶液主峰面积的10倍（10%）。 1.2.1 检测波长的确定 取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含有甘草酸二铵40μg/ml的溶液，照分光光度法（中国药典2000年版二部附录Ⅳ A），测定结果见附图9，同法测定中间体Ⅱ（7β-氨基-3-[3-甲酰氨基-2-(2-甲酰氧基乙基)-1-吡唑鎓基]甲基-3-头孢烯-4-羧酸双三氟乙酸盐）、中间体Ⅲ（7β-氨基-3-[3-氨基-2-(2-羟乙基)-1-吡唑鎓基]甲基-3-头孢烯-4-羧酸盐酸盐）、中间体Ⅲ′（1-[(Z)-2-(2-氨基噻唑-4-基)-2-甲氧基亚氨基乙酰基]苯并三氮唑-3-氧化物）紫外最大吸收波长分别为258nm、255nm、257nm，见附图10～12，可见以上中间体在252nm的波长处均有较大吸收，故选择检测波长为252nm。 1.2.2 系统专属性试验 取流动相20μl，依法测定，HPLC图谱见图13。 1.2.2 系统适用性试验 取甘草酸二铵适量，依法测定，HPLC图谱见图14，按甘草酸二铵峰计算，理论板数为6317，甘草酸二铵峰与相邻杂质峰的分离度为2.21。 1.2.3 耐用性试验 照有关物质检查方法，改变流动相组成及流速，进行耐用性试验，结果见表7（其中水相是：0.02mol/L磷酸溶液，用三乙胺调节pH值为6.5），HPLC图谱见图15～19。 表7 甘草酸二铵有关物质检查耐用性试验结果 流动相组成流速（ml/min