分子生物学聚合酶答辩.ppt

Section K: Transcription in prokaryotes(原核生物转录);K1: Basic principles oftranscription;转录：双链DNA为模板的单链RNA的酶 促合成。 RNA聚合酶 5’－3’方向 ;Key terms defined in this section(Gene VII);RNA polymerases（RNA聚合酶） are enzymes that synthesize RNA using a DNA template. Primary transcript（原初转录产物） is the original unmodified RNA product corresponding to a transcription unit.;有义链（编码链） 反义链（模板链） Promoter（启动子） 是基因起始处的DNA序列，即在编码区到 5’端（上游）。 起始位点: +1位置 终止子：转录终止的特定DNA序列。;复制与转录;Synthesis of the leading strand in the same direction as the replication fork moves;Synthesis of the Okazaki fragments;;;an overview;The only difference among DNA sense strand (the transcribed region) and RNA transcript is a base substitution (T or U). ;3’;K2 E. coli RNApolymerase; K2-1 E. coli RNA polymerase (大肠杆菌RNA聚合酶);E. coli RNA polymerase;E. coli RNA polymerase;噬菌体T3 and T7 ： RNA聚合酶只有一条多肽链 能快速合成 RNA (200 nt/sec) 并能识别自身特异的DNA序列。 ;E. coli polymerase: α subunit;β subunit 1. β亚基由 rpoB gene编码. 2. β亚基是RNA polymerase的催化中心 3. 可能含有两个结构域，分别负责转录的起始和延伸。;β’subunit 1.β’ subunit由 rpoC gene编码 2. 结合2个Zn 2+ 原子 （参与该酶的催化功能） 3. β’subunit 可能负责酶与模板 DNA的结合 . ;2. ? factors启动子识别关键，转录延伸并不需要 降低核心酶对非特异性序列的亲和力104倍 同时增加对启动子的亲和力 3. 起始完成后， ? factors会从RNA聚合酶中释放 (RNA chain is 8-9 nt);不同的 ? 因子; ? 因子控制起始; RNA 聚合酶的功能 双链DNA模板、核苷三磷酸、Mg离子激活、转录起始、RNA链延伸、终止 RNA 聚合酶的组成 大肠杆菌RNA 聚合酶 ( ? ? ?’ w ?) 全酶 (2? ? ?’ w ?－识别和起始) 核心酶 (2? ? ?’ w－延伸和终止);K3 大肠杆菌?70启动子;K-1 启动子 定义：RNA聚合酶结合到待转录序列上游的特定起始位点。;K3-23: ?70 promoter;?70 启动子大小; 启动子结构 (E.coli);启动子效率;K4 转录的起始，延伸与终止;Initiation (起始);Flowchart of RNA synthesis;Promoter binding(启动子结合);The role of ? factor in promoter binding;DNA unwinding(DNA解旋);RNA chain initiation(RNA链起始);Elongation（延伸）;有义链;RNA chain elongation(RNA链延伸);DNA的解旋区（转录泡）;转录终止:转录复合物的解体和RNA合成的终止，发生在特定的DNA序列即终止子处。;Terminator;? 因子依赖性终止子;;;延 伸;RNA polymerase/transcriptionand DNA polymerase/replication;In any chromosome, different genes