细胞工程精华课件 七、细胞重组及动物克隆技术.ppt

第七章细胞重组及动物克隆技术;第一节　细胞重组技术 第二节　细胞核移植和动物克隆技术;概念与意义 发展概况 细胞重组及其技术关键;一、概念与意义;2. 细胞重组过程： 细胞器及其分离→同种或异种细胞器与组分重组→新的重组细胞或新的性状或产品 细胞核分离、 细胞核 胞质体的获得 融合 胞质体;3. 细胞重组基本方式;4. 细胞重组意义;二、发展概况;●细胞破碎方法 ;●细胞组分分离技术 分级分离法 细胞大小、密度 密度梯度离心法 利用 细胞表面电荷 流式细胞分选仪分离法 细胞表面标志;流式细胞分选仪;●去核细胞（胞质体）的制备：;13;14;●核体的制备： 贴壁法纯化 核体需5-10h再贴壁 培养 分离 完整细胞只需2h （菲可液梯度离心）;●微核体的制备： CB具有排核作用，形成微核体； 0.1ug/mL秋水仙胺，48h，处理细胞→ 细胞微核化→离心14000r/min、20min，80-90%→1-3%牛血清密度梯度离心;● 微细胞杂种的制备过程;细胞松弛素（A～H）： 能干扰细胞质的分裂，引起细胞表面形状的改变和排出细胞核等。;● 去核细胞的性质;2. 细胞重组技术关键;21;●细胞器与完整细胞融合： ctDNA（叶绿体DNA） 　（抗药性、色素）　　　→细胞器分离→将细胞器包裹 mtDNA（线粒体DNA） 　　　　　　　　在脂质体或血影细胞→与完整细胞融合 ●生物大分子引入完整细胞： 　1975年，童第周、牛满江，鲤鱼或鲫鱼mRNA 鲤金鱼 金鱼受精卵 鲫金鱼;动物克隆技术 细胞核移植 动物克隆技术的意义及展望;1. 克隆 　　克隆：是英语“clone”的音译。简单讲就是一种人工诱导的无性繁殖方式。 ;克隆与无性繁殖：;动物克隆是一种通过核移植过程进行无性繁殖的技术。发育早期的动物胚胎细胞，或成年动物的体细胞，经显微手术移植到去掉细胞核的卵母细胞中之后，在适当的条件下，可以重新发育成正常胚胎。这种胚胎被移植到生殖周期相近的母体之中，可以发育成为正常动物个体。经过核移植而产生的动物，其遗传结构与细胞核供体完全相同。 这种不经过有性生殖过程，而是通过核移植生产遗传结构与细胞核供体相同动物个体的技术，就叫做动物克隆技术。;胚 胎 克 隆：使用的核供体细胞如果来自多细胞阶段 的胚胎，叫做胚胎克隆。 体细胞克隆：使用的核供体细胞来自动物体细胞，叫 　　　　　　做体细胞克隆。;2. 理论基础： 　　体细胞具有细胞全能性;3. 发展历程：;二、细胞核移植 1. 概念　　 　　细胞核移植技术：是指利用显微操作技术将一个细胞的细胞核移植到另一个去核卵母细胞中，或者将两个细胞的细胞核（或细胞质）进行交换，从而可能创造无性杂交生物新品种的一项技术。 　　它可分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植。;31;32;33;34;2. 发展历程;1958年到1962年，英国剑桥大学的John Gurdon和Machineer利 　用爪蟾原肠内胚层细胞核移植，培育出可育的非洲爪蟾。 1970年John Gurdon以同样的方法，用青蛙脚蹼角质化细胞进 　行移核试验，蛙卵发育成了蝌蚪。;⑵ 鱼类的核移植　　　 　　从1961年开始，童第周等以金鱼和鳑鮍鱼为材料，进行鱼类不同亚科间的细胞核移植获得成功，用以研究杂交细胞核与纯种细胞核在发育功能上的差异，以及细胞质对细胞核的影响。; 1979年，中国科学院武汉水生物研究所利用鲫鱼做移核试验。他们把鲫鱼囊胚期细胞经过385天59代连续传代培养后，再将此种培养细胞的细胞核移植到同种鲫鱼的未受精卵中。到1980年4月，他们成功地培育了两尾无性繁殖的幼鱼，其中一条发育正常。;　　1989年，童第周、牛满江又将鲫鱼胚胎细胞核移入鲤鱼去核的未受精卵中，实现了不同种间的核质杂交，成功地无性繁殖了“鲤鲫核鱼”新品种。;⑶ 哺乳类的细胞核移植 　　1977年，美国缅因州巴尔港的杰克逊实验室用“亚无性繁殖”的方式，培育出7只单亲小鼠。 ;将卵细