细胞工程精华课件 五、动物细胞培养技术.ppt

第五章 动物细胞培养技术;概述 第一节　体外细胞培养 第二节　动物细胞培养所需的基本条件 第三节　原代培养与传代培养 第四节　细胞系与细胞克隆 第五节　动物细胞的大规模离体培养 第六节　动物细胞的超低温保存技术;发展历程;动物细胞对营养要求高 　　　　——血清来源受限，质量不稳，研发无血清培养液； 动物细胞对培养环境适应性差 　 —— 生长慢，时间长，生长用动物细胞需驯化； 动物细胞培养对环境条件要求严格 ——pH，混合气体（O2、CO2、N2）； 动物细胞培养过程易产生污染 —— 要求苛刻； 各种细胞素长期培养易变异 ——需监测其形态、生长、表达过程； 绝大多数的哺乳类动物细胞具贴壁依赖性生长特征 　　 ——需载体。 ; 原代细胞培养 ●依细胞来源，可分 传代细胞培养 液体培养 ●依培养液种类不同，可分 固定培养 　　　　　　　　　　 静止培养、旋转培养、搅拌培养 ●依反应器类型和操 中空纤维培养 作方式不同，可分 固定床或流化床培养 悬浮培养 ●依在反应器生长 贴壁培养 形式不同，可分 贴壁-悬浮培养（假悬浮培养） ;培养过程;;第一节　体外细胞培养一、体外培养动物细胞类型 二、体外培养细胞的生长与增殖过程 ;一、体外培养动物细胞类型 　　按照生长方式可分为贴附型和悬浮型两大类。 贴附型细胞 1．定义：是指由它们繁衍出来的细胞只有贴附于不起化学作用的物体表面时，才能生长、生存或维持其功能的细胞。 2．分类 ：(1)成纤维型细胞；(2)上皮型细胞；(3)游走型细胞；(4)多形型细胞;（1）成纤维型细胞： 来源：中胚层的细胞，如成纤维细胞、血管内皮、心肌、平滑肌、成骨细胞等。 主要形态学特征：细胞呈梭形或不规则形，中央有圆形核，胞质向外伸出2-3个长短不同的突起，细胞群常连接成网，生长时呈放射状、旋涡状走向。多数细胞之间排列疏松，有较大细胞间隙。;成纤维???细胞;（2）上皮型细胞： 来源：外胚层和内胚层组织的细胞，如皮肤的表皮细胞、消化道与呼吸道的上皮细胞、肺泡上皮细胞、消化腺上皮细胞、血管内皮细胞等。 主要形态学特征：扁平，形态较为规整，呈多角形，中央有圆形核，生长时常彼此紧密连接成单层细胞片，呈“铺路石状”。;上皮型细胞;（3）游走型细胞： 来源：具有吞噬作用的单核巨噬细胞系统的细胞（如颗粒性细胞、淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞等）。在植块培养时，这类细胞最先从植块迁移出来。 形态学特征：细胞相互分开；常具有胞质突起或伪足，呈活跃的游走和变形运动，速度快而方向不规则。当细胞密度增大时，游走受限，类似上皮型或成纤维型的细胞。;（4）多形型细胞： 　　是一些形态上不规则的细胞，但不规则形态不是由胞质突起所致，而是一般分胞体和胞突两部分，胞突为细长形，胞体呈多角形，但没有成纤维细胞那样不规则。体外培养中最常见的是神经元和神经胶质细胞。;;① 与体内同名的细胞不完全相同 如：形态相似的成纤维细胞，可不同来源 自同一动物不同组织的成纤维样细胞相似但 发展趋向不同 ② 培养细胞的形态不稳定 条件改变，细胞形态可有变化 ;培养细胞形态不稳定血清 Hela 高血清 低血清 成纤维细胞样 上皮样细胞 pH Hela 太酸或太碱 标准pH 成纤维细胞样 上皮样细胞 细胞密度 3T3 低密度 高密度 成纤维细胞样 上皮样细胞 生长状态改变 悬浮或贴附 悬浮 贴附 圆形 成纤维或上皮样 转化与否 未转化 转化后