单基因遗传病的研究方法与技术_2013.pptVIP

单基因遗传病的研究方法与技术;已知致病基因突变分析;基因突变;基因突变;三核苷酸重复突变;基因突变类型;基因突变类型;各种类型病理性突变的比例;基因突变分析所用实验材料;RNA 的优点与缺点;;聚合酶链式反应;Southern印迹杂交;例如：脆X综合征;;前突变和全突变;Southern杂交法诊断Fragile X;Mullis F;PCR反应的特点;DNA的体外复制包括3个步骤： 变性（denaturation）:94 ?C ~95 ?C 退火（annealing）: 40 ?C ~70 ?C 延伸（extension）:72 ?C 3个步骤作为PCR的一个循环，每当完成一个循环，一个分子的模板被复制为二个，产物量以指数形式增长。;5’;延伸;;PCR反应体系;引物(Primers) ;设计引物的原则：;DNA聚合酶;扩增失败;;非特异条带;引物二聚体;应用PCR相关技术进行基因突变分析的策略与方法;策略与方法;1. 脊髓小脑性共济失调;;2. 脊肌萎缩症;应用PCR-RFLP技术分析脊肌萎缩症（SMA） 致病基因SMN;3. 腓骨肌萎缩症(CMT);MLPA分析PMP22基因重复突变; PCR-测序直接分析CX32基因来诊断X连锁腓骨肌萎缩症;4. 假肥大型肌营养不良症 ;MLPA 技术简介;MLPA 技术原理;MLPA方法检测DMD ;5. 成人型多囊肾;*;PKD1基因结构的复杂性;PKD基因分析:;PCR-测序分析;连锁分析结果;新致病基因的研究方法和技术; 家系连锁分析来定位: 适于分析较大的遗传病家系，不适于散发病例和小家系病例 二代测序技术： 适于散发病例和小家系病例;; 利用被定位的基因与在同一染色体上另一遗传座位相连锁的特点，将该基因定位在某一染色体或染色体某一区带上。;DNA STR ;PCR-STR连锁分析;;毛细管电泳分析PCR片段大小;分析;连锁分析结果;均匀分布于23对染色体上的STR SNP芯片;外显子组测序 ;基因功能相关分子遗传学研究方法;—— 隐性突变往往导致失去功能（loss of function） —— 显性突变可导致获得功能（gain of function）和失去功能 失去功能：单倍剂量不足（halpoinsufficency） 获得功能：显性负效应（dominant negtive） ;基因突变对基因功能的影响及发病机制研究;将目的DN片段克隆到质粒载体;建立遗传病动物模型;Thank you!