基于PCR的染色体步移技术研究进展_李付鹏.pdfVIP

中国生物工程杂志 Ch ina B io techno logy, 2010, 30( 12): 8794 综 述 基于 PCR的染色体步移技术研究进展 1 2 1* 1 李付鹏 伍宝朵 马朝芝 傅廷栋 ( 1 华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室 武汉 430070 2 中国农业科学院油料作物研究所 武汉 430062 ) 摘要 基于 PCR的染色体步移技术主要用于分离已知序列侧翼的未知序列, 为分离基因、步移调 控区域及填补基因组测序的空隙提供极大便利。基于 PCR的染色体步移技术依照原理可分成依 赖连接介导 PCR法和不需要酶切连接 PCR法。综述了近年来以 PCR 为基础的染色体步移技术, 比较了这些方法的原理及操作步骤, 同时总结了依赖连接介导 PCR 法和不需要酶切连接 PCR 法 的优点与缺点, 以期对研究起到借鉴作用。 关键词 染色体步移 聚合酶链式反应 侧翼序列 中图分类号 Q789 随着全基因 组高通量测 序技术的发 展, 得到了 如 1 依赖酶切连接的 PCR 人、线虫、大豆、拟南芥等一些模式物种的基因组序列, 为研究提供了 极大的便利。但到 目前为止, 绝大多 数 这类方法首先对基因组 DNA 酶切之后, 然后让酶 物种的基因组序列 仍然未知, 简 便易行的染 色体步 移 切产物自我 成环或在酶 切产物末端加 上相应 的接头。 技术在研究中仍然不可或缺。因此, 基于 PCR 的染色 以已知序列上 的特异引物 或接头上的 锚定引物, 扩增 体步移技术在现代分子生物学研究中发挥着不可替代 已知序列的上下游侧翼序列。 的作用。目前, 基于 PCR 染色体步移技术的??用主要 1. 1 反向 PCR 体现在: ( 1) 分离已知基因或基因片段的侧翼调控序列 反向 PCR ( inverse PCR, IPCR) 是 Triglia等 [ 7] 提出 或末端延伸 序列; ( 2) 鉴 定插 入位点 ( T DNA、转座 子 的扩增已知序列上游和下游未知序列的方法。该方法 等 ) 或分离插入位点两侧的 DNA 序列; ( 3) 依据基因的 的基本原理是 对已知序列 进行分析, 选 择已知序 列中 保守区段, 在其它物种中扩增 非保守序列; ( 4) 用于 全 没有的限制性 内切酶 位点, 酶切 基因组 DNA 后, 酶切 基因组测序的间隔填补, 拼接 完整的基因组序列; ( 5) 片段环化自连, 然后利用已知序列设计的反向引物, 扩 图位克隆过程中获得连锁标记两侧的叠连群片段。 增已知序列两侧 的未知序列, 原理如图 1。因此, 这种 自从 M ullis发明