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SAhIL21双功能融合蛋白的表达尧纯化及生物学活性检测
1240 南方医科大学学报(J South Med Univ) 2010;30(6)
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SA/hIL21双功能融合蛋白的表达尧纯化及生物学活性检测
法萍萍袁张 振袁李金龙袁胡志明袁高基民渊南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所袁广东 广州 510515冤
摘 要院 目的 制备链亲和素 SA 标记的人白细胞介素 21 融合蛋白 SA-hIL-21 检测其生物学活性 方法 构建
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hIL21-SA-pET21 及 pET24a-SA- hIL21 质粒 利用大肠杆菌 BL21 DE3 表达两种双功能融合蛋白 并利用镍金属螯合
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层析柱 Ni-NTA 纯化 之后透析复性 Western blotting 进行鉴定 最后利用 MTT 法检测 hIL21-SA 及 SA- hIL21 融合蛋
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白与抗 CD3 单克隆抗体 anti-CD3 共刺激人外周血淋巴细胞的增殖活性 流式细胞仪分析两种融合蛋白对生物素化
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的 MB49 肿瘤细胞的锚定修饰效率 结果 hIL21-SA 及 SA- hIL21 重组融合蛋白在大肠杆菌中实现了高效表达 约占菌
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体蛋白的 30% 经复性后 hIL21-SA 及 SA- hIL21 具有了双重活性 即不仅可以与抗 CD3 单抗共刺激淋巴细胞的增殖
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而且具有了 SA 介导的高效结合已生物素化的 MB49 肿瘤细胞表面的功能 表面修饰效率 95.18% 96.91% 结论 本
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实验成功研制了具有双重活性的 hIL21-SA 及 SA- hIL21 融合蛋白 两种融合蛋白的双功能活性无显著性差异 该项研
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究为 SA/hIL21 双功能融合蛋白应用于肿瘤疫苗以及肿瘤局部治疗奠定了基础
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