实验室常用试剂、缓冲液的配置方法.docVIP

实验室常用试剂、缓冲液的配制方法 1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：1 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。4. 将溶液定容至1 L。5. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量：1 L配制方法：1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。4. 室温保存。 1.5 M Tris-HCl (pH8.8)组份浓度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：?1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。?2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。?3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。?4. 将溶液定容至1 L。?5. 高温高压灭菌后，室温保存。?注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 3 M 醋酸钠(pH5.2)组份浓度：3M 醋酸钠配制量：100ml配制方法： 1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。PBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量：1 L配制方法：1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。4. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。10 M 醋酸铵组份浓度：10 M 醋酸铵配制量：100 ml配制方法：? 1. 称量77.1 g醋酸铵置于100～200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。?2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。?3. 使用0.22 ?m滤膜过滤除菌。?4. 密封瓶口于室温保存。?注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。Tris-HCl平衡苯酚配制方法：1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。??2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。??3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：?① 液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。?② 加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色，有助于方便识别有机相。?③ 加入等体积的1 M Tris-HCl（pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。?④ 重复操作步骤③。?⑤ 加入等体积的0.1 M Tris-HCl（pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。?⑥ 重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。?⑦ 使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。?⑧ 将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。 苯酚/氯仿/异戊醇 (25 : 24 : 1)配制方法：1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚