棉铃虫触角羧酸酯酶HaCXE6基因的克隆、序列分析与-应用昆虫学报.doc

PAGE  PAGE 17 棉铃虫触角羧酸酯酶HaCXE6基因的克隆、序列分析与mRNA表达? 资助项目：河南省杰出青年科学基金项目（074100510013） 姬继超 王丽莎 赵曼 李为争 原国辉 罗梅浩 郭线茹?? 通讯作者，E-mail：guoxianru@126.com ? （河南农业大学植物保护学院 郑州450002） 摘 要 为研究羧酸酯酶（carboxylesterase，COECarboxylesterase 的缩写为 “COE” s）在棉铃虫Helicoverpa armigera（Hübner）嗅觉触角中的生理中的作用功能，采用RT-PCR、RACE方法从棉铃虫雄蛾触角中克隆得到一条COE基因羧酸酯酶基因cDNA全长序列（GenBank No.基因登录号为 JX306730），命名为HaCXE6。HaCXE6该基因开放阅读框读码框全长1 623 bp，编码540个氨基酸，预测蛋白质分子量61. 02 Kda，和等电点分别为61.02kD和8. 06。氨基酸序列比对分析表明，HaCXE6与海灰翅夜蛾Spodoptera littoralis触角羧酸酯酶CXE6一致性同源性最高，为68%；棉铃虫不同功能羧酸酯酶聚类分析进化关系显示HaCXE6与气味降解酶CCE006a最相近，由此推定HaCXE6可能参与气味物质的降解。与其它昆虫触角羧酸酯酶多序列比对分析发现，蛋白结构分析显示HaCXE6具有酯酶活性含酯酶活性必须的催化残基三聚体结构（Ser199，Glu323，His434），也保持着α/β-酯酶家族的特征基序Gly-xX-Ser-Xx-Gly。对该基因在不同组织和发育时期表达量的荧光定量PCR分析时空表达分析表明现在 “时空表达”这种表述已经很少用。根据自己的实验，可以描述为“不同组织部位的表达”或者“不同龄期的表达” ，HaCXE6在雌、雄蛾各个部位均有表达，雌蛾腹部与雄蛾足中表达量最高；卵至成虫各个时期均有表达，蛹中表达量最高。 关键词 棉铃虫触角羧酸酯酶，基因克隆，实时荧光定量PCR时空表达，功能分析 Cloning, sequence analysis and mRNA expression levels of an antennal carboxylesterase gene HaCXE6 from Helicoverpa armigera（Hübner）（Lepidoptera：Noctuidae） JI Ji-Chao, WANGang Li-Sha, ZHAOhao Man , Li LI Wei-Zheng , Yuan YUAN Guo-Hui , Luo LUO Mei-Hao , Guo GUO Xian-Ru?? ( College of Plant Protection, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China) Abstract In order Tto explore study the physiological functionsrole of carboxylesterase s( COE ) in the  HYPERLINK app:ds:olfactory \t olfactory  HYPERLINK app:ds:sensation \t sensation of Helicoverpa armigera （Hübner）antennae, a new COEcarboxylesterase gene cDNA，named HaCXE6, was cloned from Helicoverpa armigera male antennae ( GenBbank accession nNo. JX306730 ) byusing RT-PCR and RACE straterymethods. The full-length open reading frame is 1 623 bp in lengthsize, and encodesing 540 amino acid residues with the predicted protein molecular mass of 61. 02 KkDa molecular weight and 8.06 isoelectric point of 8.06.“the predicted 61.02KDa molecular weight and 8.06 isoelectric point”可改为“the predicted protein molecular mass of 61