绿色荧光蛋白及其在GMOs 生态监测中的应用.pdf

植物学通报 Chinese Bulletin of Botany 2007, 24 (2): 134?140, .综述. 绿色荧光蛋白及其在 GMOs 生态监测中的应用 沈宝成 1,2, 李梅 3, 石纪成 4, 张木清 2, 米湘成 1, 魏伟 1* 1 中国科学院植物研究所, 北京 100093 2 福建农林大学农业部甘蔗生理生态与遗传改良重点开放实验室, 福州 350002 3 青海省卫生职业技术学院, 西宁 810000; 4 湖南省宁乡县农业局, 宁乡 410600 摘要 绿色荧光蛋白 (green fluorescent protein, GFP)是在海洋无脊椎动物水母(Aequorea victoria)中获得的一种由238 个氨基酸组成的多肽。该多肽通过翻译后加工形成生色基团, 产生稳定的荧光, 而且这种荧光很容易被检测。GFP作为动、 植物以及微生物基因工程研究上的一种广泛的选择标记, 具有检测灵敏度高、操作简便、不需要添加任何底物或辅助因子等 优点, 更重要的是利用GFP可对GMOs进行快速、原位、实时、活体监测。本文概括介绍了GFP的特性、改造及其检测, 并从 生态学角度论述了GFP在GMOs生态监测研究中的应用及其发展前景。 关键词 生物安全, 生态监测, 适合度, 基因流, 绿色荧光蛋白 沈宝成, 李梅, 石纪成, 张木清, 米湘成, 魏伟 (2007). 绿色荧光蛋白及其在 GMOs 生态监测中的应用. 植物学通报 24, 134?140. 近年来, 遗传修饰生物体(genetically modified 种非酶性报告因子, 能够自身催化形成发色基团并在紫 organisms, GMOs), 尤其是转基因植物(transgenic 外光或蓝光的激发下发出明亮的绿色荧光。与其它传 plants)的研究得到了突飞猛进的发展, 许多转基因植物 统的标记相比, GFP 具有荧光强度高、不需要底物或 已进行了田间试验, 有些已被批准商业化应用。GMOs 辅助因子、无种属特异性、分子量小、易与其它蛋白 在带来巨大的经济效益和社会效益的同时, 也具有潜在 融合、对细胞基本无毒害、易于检测、可在活细胞实 的风险。有关它对生态环境的影响已有不少研究报道, 时、原位观察等优点, 因而能方便可靠地用于转基因及 积累了许多有价值的资料。GMOs 向环境释放后可能 其表达产物的监测。本文概括介绍了 GFP 的性质、荧 带来的生态风险问题也越来越受到人们的重视。要对 光检测并从生态学角度论述了GFP在GMOs监测研究 GMOs释放的潜在生态风险进行正确评估就必须对其进 中的应用及其发展前景。 行长期有效的监测(钱迎倩, 1998)。 鉴于几乎所有GMOs中都含有标记基因, 且同一标 1 绿色荧光蛋白的结构及其性质 记基因常被转入不同的生物中, 因此标记基因是筛选鉴 定 GMOs 的有效方法。现有的标记基因主要有: 分泌 绿色荧光蛋白是Shimomura等(1962)在研究维多利亚水 型碱性磷酸酶基因(SEAP)、b- 葡糖醛酸糖苷酶基因 母荧光现象时首先报道的。Prasher等(1992)首次从维 (GUS)、b- 半乳糖苷酶基因(LAC-Z)、萤火虫荧光素酶 多利亚水母的 cDNA 文库中克隆到绿色荧光蛋白基因 基因(LUC) 、氯霉