动物胚胎工程复习资料2.docx

补充内容： 一 动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的 HYPERLINK /view/72787.htm \t _blank 培养基中，让这些 HYPERLINK /view/1160417.htm \t _blank 细胞生长和增殖。 动物细胞培养的条件 1.无菌、无毒的环境：对培养液和所有培养用具进行无菌处理，通常还要在培养液中加入一定量的的抗生素，以防被污染。此外应定期更换培养液，以便清除代谢产物防止细胞代谢产物累积对细胞自身产生危害。 2.营养物质：无机物（无机盐、微量元素等），有机物（糖、氨基酸、促生长因子等） 3.血清和血浆 (提供细胞生长必须的营养成份) 4. HYPERLINK /view/8193.htm \t _blank 温度和 HYPERLINK /view/307864.htm \t _blank pH（36.5±0.5℃，7.2~7.4） 5.气体环境（95%的空气+5%CO 2的混合气体） 其中5%CO2气体是为保持培养液的pH稳定 体外细胞培养所需营养物质与体内基本相同，例如，需要 HYPERLINK /view/49321.htm \t _blank 糖、 HYPERLINK /view/15155.htm \t _blank 氨基酸、 HYPERLINK /view/151020.htm \t _blank 无机盐、促生长因子、微量元素等。将细胞所需的上述物质按其种类和所需数量严格配制而成的培养基，称为 HYPERLINK /view/585468.htm \t _blank 合成培养基。由于动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚，所以需要加入动物血清以提供一个类似生物体内的环境，因此在使用合成培养基时，通常需加入血清、血浆等一些天然成分。 基本过程 取动物胚胎或幼龄动物器官、组织。将材料剪碎，并用胰蛋白酶（或用胶原蛋白酶）处理（消化），形成分散的单个细胞，将处理后的细胞移入培养基中配成一定浓度的细胞悬浮液。悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，成为细胞贴壁。当贴壁 HYPERLINK /view/35503.htm \t _blank 细胞分裂生长到???相接触时，细胞就会停止分裂增殖，出现 HYPERLINK /view/472342.htm \t _blank 接触抑制。此时需要将出现 HYPERLINK /view/472342.htm \t _blank 接触抑制的细胞重新使用胰蛋白酶处理。再配成一定浓度的细胞悬浮液。另外，原代培养就是从 HYPERLINK /view/1051481.htm \t _blank 机体取出后立即进行的细胞、组织培养。当细胞从动植物中生长迁移出来，形成 HYPERLINK /view/1537823.htm \t _blank 生长晕并增大以后，科学家接着进行 HYPERLINK /view/542619.htm \t _blank 传代培养，即将原代培养细胞分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续生长、增殖。通过一定的选择或纯化方法，从 HYPERLINK /view/585450.htm \t _blank 原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质的细胞称为 HYPERLINK /view/350392.htm \t _blank 细胞株。当培养超过50代时，大多数的细胞已经衰老死亡，但仍有部分细胞发生了遗传物质的改变出现了无限传代的特性，即癌变。此时的 HYPERLINK /view/1407515.htm \t _blank 细胞被称为 HYPERLINK /view/193322.htm \t _blank 细胞系。 方法 消化法 消化分离的方法是最基本的方法，在该方法的基础上，可进一步分离不同细胞。 HYPERLINK /view/3873520.htm \t _blank 细胞分离的方法各 HYPERLINK /view/57942.htm \t _blank 实验室不同，所采用的消化酶也不相同（如 HYPERLINK /view/50359.htm \t _blank 胶原酶，透明质酶等）。 1、器材：将孕鼠或新生小鼠拉颈椎致死，置75%酒精泡2—3秒钟（时间不能过长、以免酒精从口和肛门浸入体内）再用 HYPERLINK /view/442554.htm \t _blank 碘酒消毒腹部，取胎鼠带 入超净台内（或将新生小鼠在超净台内）解剖取肝脏，置平皿中。 2、用Hank’s液洗涤三次，并剔