免疫组化1_概论抗原抗体.pptVIP

免 疫 组 化 Immunohistochemistry; 学习本章节的总体要求 *1. 熟悉免疫组织化学技术特点及其原理 *2.掌握免疫组织化学染色的操作流 程 *3.熟悉免疫化学反应相关术语及其所用免疫试剂的来源和质量控制 4.了解多克隆抗体制备程序与操作要求 5.了解单克隆抗体制备原理和步骤 ;概 论 一、什么是免疫组织化学 免疫组织化学是应用免疫学和组织化学原理，对细胞组织标本中的某些多肽、蛋白质等大分子物质进行定性、定位、定量研究的一门科学。; 这项技术本质上是一种染色及原 位示踪技术，它是在酶组织化学基础 上发展起来的，始于20世纪中期。;免疫荧光标记抗体技术---Coons 1940年免疫酶标抗体技术---Abakane 1963不标记酶抗体（酶抗酶复合物）技术---Sternberger 1970胶体金免疫标记技术和亲和标记技术---Hsu 1985; 免疫试剂，自1975年Kohler和Milstein发明了单克隆抗体制备的杂交瘤技术后，已从采用多克隆抗体转入了广泛应用单克隆抗体时代。目前商品供应的特异性第一抗体和交联第二抗体，绝大多数都为单克隆抗体。 ; 1.特异性强 专一 2.敏感性高 检测阈值达ng或pg水平 3.定位准确 既可定性、定位，又可定量 4.三位一体 形态、功能和代谢三结合 缺点：干扰多，易出现假阳性 ;?（一）?组织处理与切片选择 （二）免疫染色的前处理 试剂准备（示踪，放大，标记） 消化 阻断 *（三）免疫组化染色 原理、优缺点、流程 （四）免疫染色的后处理 增强、衬染、封固 ;*（五）结果判断与对照设置 方法众多 敏感不同 程序雷同 按需选用 ;第一节 抗原和抗体;一、抗原： 凡能刺激机体产生特异性免疫应答（免疫原性），并能与相应免疫应答物（抗体或致敏淋巴细胞）在体内、外发生特异性结合（反应原性）的物质。;; 抗原决定簇(表位)：抗原分子中决 定抗原特异性的活性化学基团，其性 质、数量、空间构型决定抗原的特异性。 ---免疫组化的精确性、特异性 ;交叉反应：抗原（或抗体）除与其相应抗体（或抗原）特异结合外，有时可与其他抗体（或抗原）发生反应。 ---多数天然抗原表面带有多个相同或不同的表位 ---不同抗原的表位相同或相似的情况下可发生交叉反应 ---免疫组化的假阳性 ;二、抗体;抗体的分子结构 1.抗体分子在立体构型上都是Ig， 但 Ig不都是抗体。 2.各类Ig的基本单位都是四条肽链的对称结构,包括二条相同的重链(heavy chain, H链),及二条相同的轻链(light chain,L链),每条重链(H链)和轻链(L链)分为氨基端(N端)和羧基端(C端)。; 3 .两条重链间，两条轻链间及重链和轻链间，分别借二硫键连接。此为免疫球蛋白的基本结构，又称为免疫球蛋白的单体,呈“Y”字构型。; 4.重链上结合有不同量的糖,故Ig属糖蛋白。根据重链抗原性的不同可分为5类，即 μ链，γ 链， α链，δ链和ε链， 由它们组成的Ig分别称为IgM，IgG，IgA，IgE和IgD。; 5.轻链也可根据其化学结构和抗原性的差异分为κ和λ二型。一个Ig分子的二条轻链型别相同，绝无可能κ型和λ型共同存在于同一个Ig分子中。; 6. Ig单体的氨基酸序列可分为恒定区（constant region,C区)和可变区（variable region,V区）。---可变区位于Ig多肽链的N端，占轻链的约1/2及重链的约1/4（Ig结合抗原的所在部位）---恒定区位于Ig多肽链的C端，占轻链的余下的1/2及重链的3/4（补体结合域，Fc受体结合位点，Ig 抗原决定簇等所在部位）　;7. Ig的水解片断可因选用的水解酶不同而异。采用木瓜蛋白酶(papain)水解Ig时：---2个相同的Fab (fragment antigen binding)段，即抗原结合片断---1个Fc （fragment crystalliable) 段，即可结晶片断，拥有Ig