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实时荧光定量PCR技术,原理,应用及实践,第2代染料
Real-time PCR基因表达定量;*;*;*;康为世纪生物科技有限公司;Real-time PCR基因表达定量;PCR: 国王和象棋的故事;PCR:伟大的天才发明;PCR:理想与现实;确定模板初始数量‘real-time’使qPCR成为可能;Real-time PCR 应用;Real-time PCR: 发光原理;染料法qPCR基因表达水平检测;以各自样本中内参(housekeeping)基因为标杆,
比较两样本中目的基因的相对丰度;Housekeeping gene selection;Housekeeping gene selection;Housekeeping gene selection;通过实验选择Housekeeping gene
实测多个备选Housekeeping gene
以各备选基因的几何平均数为均一化标准,检验各基因在给定条件下的表达稳定性
参考资料
geNorm 网站 - http://medgen.ugent.be/~jvdesomp/genorm/
Vandesompele et al., Genome Biology, 2002, Accurate normalization of real-time quantitative RT-PCR data by geometric averaging of multiple internal control genes;Housekeeping gene 康为产品;染料法qPCR基因表达水平检测;样本处理与RNA提取;染料法qPCR基因表达水平检测;逆转录;一步法 or 两步法?;;反应条件优化;反应条件优化;Real-time PCR ;反应条件优化Master mix的选择;Master Mix的选择 –名副其实;背景知识 PCR热启动;Master mix的优化DNA聚合酶;Master mix的优化荧光染料;反应条件优化Master mix的选择;Master Mix的优化 对仪器的适应性;Master Mix的优化对仪器的适应性 ;Master Mix的优化校正染料;抗污染;Trouble shooting;qPCR反应优化非关键技术外包服务;谢谢!
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