1抗体的制备与应用.ppt

抗体的制备与应用参考书：1.医学免疫学纲要（研究生教材）。主编：章崇杰 。四川大学出版社。2.医学实验技术的原理与选择（卫生部十一五规划教材）。主编：李幼平。人民卫生出版社。免疫教研室 胡丽娟immune_hulijuan@126.com;Emil von Behring (1845-1917);Antibodies (Ab) are products obtained by antigen stimulating B lymphocytes, then B cells will proliferate into plasma cells to produce specific antibodies which can react specifically with corresponding antigens. Immunoglobulins (Ig) are all those globulins which have the function or structure of antibody. Two kinds of immunoglobulins: secreted immunoglobulins (sIg): Antibody membrane immunoglobulins (mIg): BCR;Day 0 2 4 6 8;Antibody Structure and Function;Structure of immunoglobulins;;peptide;The function of Ig; C区的功能 激活补体 Immune complex（IC） ? 激活补体经典途径 与细胞表面FcR结合 1）调理作用（opsonization)； IgG 或IgM的Fc段与吞噬细胞表面FcR结合?促吞噬； 2）抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用 （Ab-dependent cell-mediated cytotoxicity,ADCC) 3) 介导I型超敏反应 IgE的Fc段与肥大细胞表面FcR结合?受体桥联?细胞活化 穿过胎盘和粘膜 IgG通过胎盘；sIgA穿过粘膜;; 抗原是启动机体免疫系统的先决条件 Antigens are substances capable of stimulating immune system, generating antibodies and/or effector lymphocytes and binding specific with the antibody and effector lymphocytes in vivo or in vitro.; Immunologic properties of Ags;抗原决定基-抗原特异性的分子基础;T细胞决定基（T细胞表位）：T细胞决定基主要位于抗原分子内部，必须由APC将抗原加工处理为小分子多肽并与MHC分子结合，然后才能被TCR所识别。 B细胞决定基（B细胞表位）：BCR能直接识别未经APC加工的天然抗原，其识别的B细胞表位主要位于抗原分子的表面，与BCR具有易接近性。;主要内容;概述;第一节 多克隆抗体的制备与应用（polyclonal antibody，PcAb);传统抗血清 （多克隆抗体）;多克隆抗体的优缺点; 抗A;第二节 单克隆抗体的制备与应用(monoclonal antibody，McAb);单克隆抗体制备流程;; ;3.杂交瘤细胞的筛选;DNA合成途径;;;配制方案：杂交瘤细胞（（1～5）x106/ml) + 细胞冻存液(30%～40% 牛血清，50%～60% RPMI-1640培养液，10%DMSO ) “慢冻”：分步冷冻，30℃→-70℃→液氮? “快融”：取出立即浸入37℃～40℃水浴中，使其迅速融化、复苏;;;单克隆抗体（McAb）的优缺点 优点： 成分、结构均一，特异性强。一种McAb分子的所有区域完全相同，只针对一种抗原决定基，避免了交叉反应。 效价高 使用一种抗原免疫动物，可以获得针对不同抗原决定基的不同特异性的McAb。 杂交瘤细胞能在体内外无限繁殖、传代，因此产量高，可连续生产;;单克隆抗体在医学上的应用;;单克隆抗体用于免疫治疗存在的问题 单克隆抗体的特异性 由于肿瘤特异性抗原较少，缺乏对肿瘤有严格特异性的单抗，对正常组织有交叉反应 异种抗体反应 鼠源性单抗用于人体，导致超敏反应 生产成本高,技术要求高，稳定性差，难于普及应用 ;第三节 基