生物工程工程技术_3.pptVIP

第二节 细胞工程;细胞工程;①1958年，美国Steward在用野生胡萝卜游离韧皮部细胞进行体外培养的标本中，观察到已经高度分化的细胞可以重新分裂，而回复至胚性细胞状态。 ;1997年克隆羊“多莉”诞生 ;;一、细胞的全能性;细胞分化与细胞全能性之间的关系;①一个受精卵发育成一个新个体，细胞除了经过有丝分裂使细胞数目增多以外，还必须经过细胞分化，使细胞在形态、结构和生理功能上均发生稳定性的差异，形成不同的细胞和组织。 细胞分化是一个渐变过程，在胚胎发育的早期，细胞外观上尚未出现明显变化前，细胞分化前途就已经决定，以后依次渐变，不能逆转，因此分化是一种持久的、稳定的变化。 ;②由于体细胞是通过有丝分裂繁殖的，一般已分化的细胞都有一套与受精卵相同的染色体，携带有本物种的全部遗传信息，因此分化的细胞有发育成完整新个体的潜能，这就是细胞的全能性，因此，在合适的条件下，有些分化的细胞具有恢复分裂、重新分化发育成完整新个体的能力。 ③细胞具有全能性和全能性表达是两个不同的概念。 　　体内分化的植物细胞具有全能性，但在体内不能表达，需在一定条件下离体培养才能表达。 ④ 体内所有细胞中受精卵全能性最高，卵细胞比体细胞潜在的全能性高，分化的植物细胞比分化的动物细胞全能性易表达，但需一定条件下离体培养。 ;二、植物细胞工程 ;离体的植物器官、组织或细胞 脱分化（又叫去分化） 愈伤组织（排列疏松而无规则，高度液泡化 再分化 的呈无定形状态的薄壁细胞） 根或芽等器官 植物体;过程名称;1.快速繁殖 2.培育无病毒植物 3.生产药物、食品添加剂、香料、色素和杀虫剂等 4.制作人工种子 5.转基因植物的培育 ;概念：应用组织培养技术，快速繁殖植物（也叫快速繁殖技术） 原理：植物细胞的全能性 优点：繁殖率高，可大批量生产 取材少 培养周期短 保持优良性状;作物脱毒;人工种子;2、植物体细胞杂交;3、植物体细胞杂交;植物细胞融合;原生质体制备（酶解法去细胞壁） 原生质体融合（人工诱导） 杂种细胞的筛选和培养（形成愈伤组织） 杂种植株的再生与鉴定;(1);白菜;常见的植物细胞培养有： 1、花粉培养 花粉或花粉洗涤后在培养基上剪碎，培养形成愈伤组织，分化形成根茎，生长为单倍体花粉植株，经加倍成为普通植株 花粉培养是目前育种重要手段之一 ;2、原生质体培养 去壁（纤维素酶、果胶酶） 细胞——原生质体——愈伤组织——根、茎——植株。 细胞融合，基因转移必须要在原生质体上进行。 二、细胞融合：（cell fusion） 创立于60年代，指在一定的条件下将两个或多个细胞融合为一个细胞的工程，细胞融合又称细胞杂交（cell hybridyixation）杂种细胞的形成范围较广，不仅动、植物种内或种间可杂交，而且动、植物之间也可杂交。;如：1970年蕃茄与马铃薯之间的原生质体融合成功及杂种植株（pomato)的育成。 以色列抗寒番茄的育成;植物组织培养的过程;;4、植物细胞培养的应用;案 例 1; 紫杉醇存在于红豆杉属植物的树皮、叶及茎中， 其中树皮中的含量最高，大约从12000株成年紫杉树中才能提取1KG的紫杉醇，而且紫杉的生长周期很长，在世界分布很少。 紫杉醇的国际市场价格为450美元/g ; 日本有关组织从红豆杉中诱导产生愈伤组织，筛选得到细胞培养4周就增殖了5倍，紫杉醇的含量达到了0.05％，比树皮中紫杉醇的含量高达10倍。 Ketchum从6种紫杉醇属植物中进行愈伤组织的诱导，获得了产生紫杉醇的高产细胞株，在悬浮培养下，细胞内的紫杉醇含量超过了20mg/L。 清华大学化工系生物化工研究所通过固液两步培养法可以在4周内获得20g/L干物质，利用代谢调控技术在2~3天内将紫杉醇的含量提高到0.063%左右。 ;案 例 2 利用植物细胞培养生产天然色素—紫草宁 紫草宁可用作创伤、烧伤以及痔疮的治疗药物，同时又因为其漂亮的紫红色而作为高级色素使用。 紫草宁产生于亚洲的多年生 植物紫草的根部 。但紫草资源严重不足，在日本，紫草已濒临灭绝，在我国，紫草（Arnebia euchroma)列入了国际二级保护植物;;紫草的人工栽培成活率低，而且直接提取紫草宁的无法满足市场需求。 化学合成紫草宁的工艺非常复杂，且最终产率只有0.7％，生产成本昂贵。 紫草宁在国际市场上售价高达7000美元/kg;1974年Tabata等就研究了用于培养紫草细胞的培养基。 1981年Tabata和Fujita等又用大的培养容器进行细胞悬浮培养并获 得了紫草宁衍生物。 日本在198