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HE组织切片制备标准操作程序 一、Purpose 目的 保证病理切片质量，以达到准确的病理诊断。 二、Scope范围 石蜡包埋组织切片 三、Reagents and instrument试剂，仪器 苏木素、伊红、切片机、水浴箱。 四、Process工作流程 （一）切片 1、将切片刀安装在持刀座上； 2、将蜡块固定于支持器上； 3.、细心移动刀座或蜡块支持器，使蜡块与刀刃接近，旋紧刀座，观察蜡块面是否与刀座相平，如不平须调节支持器，使蜡块面与刀面平行； 4、修块（粗切）：用右手匀速旋转切片机轮，修切蜡块表面至包埋其中的组织块全部切到。修块粗切片的厚度为15-20微米（注意：对于医嘱再次深切片特别是在原切片中发现了有意义病变而进行的深切片应尽量少修块，以尽量好地获得有关病变的连续性）； 5、调节切片厚度调节器（一般为2-4 微米），进行切片。切出的蜡片应连续成带状，完整无缺，厚度适宜（3-5 微米）、均匀，无刀痕、颤痕、皱褶、开裂、缺损、松解等； 6、以专用镊子轻轻夹取完整、无刀痕、厚薄均匀、干净的蜡片，放入漂片机的温水中（40-50℃左右），使切片全面展开；每切完一个蜡块后必须认真清理水面，不得遗留其它病例的组织碎片以免污染。 7、将蜡片附贴于处理过的载玻片上，蜡片应放在载玻片右2/3处的中央，留出载玻片左1/3的位置用于贴附标签；蜡片与载玻片之间无气泡；为防止蜡片滑落，蜡片的一角（远离组织的）可粘在载玻片边缘上；若一片载玻片上捞两片以上的蜡片，必须把蜡片均匀贴附在载玻片上，保持制片的美观。 8、必须立即在置放了蜡片的载玻片一端（待贴标签处），用铅笔准确清楚地标记其相应的病理号（包括次级号），外借白片，需在每张白片上注明对应的病理号。 9、将置放了蜡片的载玻片呈45度斜置片刻；待载玻上的水分流下后，将其插入专用的染色架中，最后置于恒温箱中烘烤（72℃左右，15分钟），然后即可进行染色。 10、切片注意事项 （1）切片前蜡块要冷冻，这样容易切片（甲状腺、淋巴结及胃镜等特殊组织，必须控制冰冻时间）。 （2）如遇难切的蜡片时，可用与蜡块切面差不多大小的薄纸潮湿后贴在蜡块上切片，然后将附有蜡片的一面朝上放入水中漂片。 （3）如遇易脱片组织（如血凝块、脑组织）时，可用多聚赖氨酸或APES 处理过的玻片来捞片。 （4）总是切不出完整的蜡片，或皱缩或卷片，可能是刀不利。 （5）切出的蜡片总是皱缩，可能是蜡块冷冻时间不够，或是组织脱水、浸蜡效果不好。 （6）切片厚薄不匀或空片，可能是刀未固定紧或蜡块未夹紧，也可能是切片机有问题。 （7）烤片时间与温度有关，一般时间宁长勿短，否则会造成脱片。一般烤片温度控制在62℃，时间为30min左右。 （8）连续切片放入热水漂片时，不要捞取第一、二张蜡片，因为前2 张蜡片厚、组织有空洞（镜下可见）。 （9）用于展片漂片仪的温水必须认真清理水面，不得遗留其它病例的组织碎片以免污染。 （二）HE染色 1、自动染色：见《染色机使用及维护标准操作程序》 2、手工染色 （1）脱蜡 ①二甲苯Ⅰ（AR） 5分钟 ②二甲苯Ⅱ（AR） 5分钟 ③100%酒精Ⅰ（AR、无水乙醇） 1分钟 ④100%酒精Ⅱ（AR、无水乙醇） 1分钟 ⑤95%酒精（工业酒精或医用酒精） 1分钟 ⑥80%酒精（工业酒精或医用酒精） 1分钟 ⑦自来水浸洗 1分钟 (2)染色 ①苏木素染液 6分钟 ②水冼 1分钟 ③0.5-1%盐酸酒精分化片刻（颜色由蓝变红即可） ④自来水冲冼10分钟左右（颜色由红变蓝）。（然后95%酒精片刻，主要是避免所带的水份稀释以下的伊红酒精，此步可免） ⑤伊红染液浸染 （3）脱水、透明、封固 ①75%酒精 0.5分钟 ②85%酒精Ⅰ 1分钟 ③95%酒精Ⅱ 1分钟 ④100%酒精Ⅰ 1分钟 ⑤100%酒精Ⅱ 1分钟 ⑥石炭酸二甲苯(1:3) 10秒钟 ⑦二甲苯Ⅰ 透明 1分钟 ⑧二甲苯Ⅱ 透明 1分钟 ⑨取出后用中性树胶封固。 3、HE染色注意事项（HE STAINING PRECAUTIONS）： （1）二甲苯脱蜡时间冬季长些，夏季可短些，为防止脱蜡不净影响染色，脱蜡时间宁长勿短。 （2）盐酸酒精分化时间灵活掌握，可以在切片蓝化后镜下观察。 （3） 染色后的脱水透明也很重要，若脱水不完全，切片会模糊不清，脱水的乙醇要保持纯度，切片在进入脱水乙醇前尽量把水份去掉。 五、References相关文件 （一）SOP-PA029-G《染色机使用及维护标准操作程序》 （二）SOP-PA028-G《切片设备使用及维护标准操作程序》 （三）EF3035-G中华医学会《临床技术操作规范-病理学分册》 （四）EF3008-G浙江省医疗机构管理与诊疗技术规范丛书《病理诊断与技术规范》 六、Records相关记录 （一）SOP-PA028-01-