MS培养基母液的配制培养基制备及灭菌.docx

MS培养基母液的配制、培养基制备及灭菌 一、实践目的 通过本实训，学会配制大量元素、微量元素、铁盐、维生素、生长调节剂等培养基母液。通过MS固体培养基的配制，掌握配制培养基的基本技能。通过对培养基和培养用具的灭菌，掌握高压蒸汽灭菌和干热灭菌的一般操作技术。 二、实践用具与材料 移液管、电炉、PH试纸、培养瓶、标签、铅笔、量筒、烧杯、容量瓶、广口瓶、玻棒、电子天平、托盘天平、棉花、报纸等用具。 硝酸铵、硝酸钾、EDTA、硫酸亚铁、甘氨酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、IAA、BA等药品、琼脂、蔗糖、蒸馏水、0.1mol/L的NaOH、0.1mol/L的HCL、95%酒精 三、实践学时与场地 10学时，植物组培实验室。 四、实践内容 （一）三角瓶棉塞的制作 棉塞的作用有：一是防止杂菌污染，二是保证通气良好。 要求： 形状，大小，松紧适度 制作：（1）取一大小适当的纱布，将其中心铺于三角瓶口，任其自然下垂至外壁，用玻璃杯将纱布向瓶内推进，至棉塞所需长度，握住瓶壁及纱布，取适量棉花向内填塞并压紧 （2）将棉塞尾部加适量棉花并压紧，使其略大于瓶口，收紧尾部纱布，并用棉线扎进，剪去多余线头和纱布，棉塞制作完毕 （3）使用时，再用牛皮纸或二层报纸包扎好 （二）培养基母液的配制 母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍的溶液。 优点：（1）保证各物质成分的准确性。 （2）便于配置时快速移取。 （3）便于低温保藏。 1、步骤  = 1 \* GB2 ⑴测定各类母液保存容器容量，记录。 ⑵根据记录设计各种母液所配浓度倍数和制培养基时取用量 ⑶计算各种药品所需用量  = 4 \* GB2 ⑷称量药品 大量元素等大于0.1g用托盘天平称量，微量元素等小于0.1g用电子天平称量。  = 5 \* GB2 ⑸溶解  = 6 \* GB2 ⑹定容  = 7 \* GB2 ⑺写上标签  = 8 \* GB2 ⑻装瓶 将配制好的母液分别装入试剂瓶中，贴好标签，注明各培养基母液的名称、浓缩倍数、日期。注意将易分解、氧化的溶液，放入棕色瓶中保存。 （9）冰箱保存。 2、母液配方 MS培养基配方=见教材  = 1 \* GB2 ⑴MS大量元素母液（10X） 称10升量溶解在1升蒸馏水中。配1升培养基取母液100ml。  = 2 \* GB2 ⑵MS微量元素母液（100X） 称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。 注意：CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量，即0．25 mgX10=2．5 mg（100倍量25 mg）称取后，定容于100ml水中，每次取1ml（0.1ml，即含0．25 mg的量）加入到母液中。  = 3 \* GB2 ⑶MS铁盐母液（100X） 称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。 注意配制时，应将两种成分分别溶解在少量蒸馏水中，其中EDTA盐较难完全溶解，可适当加热，并将pH调至5.5。混合时，先取一种置容量瓶（烧杯）中，然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡，至产生深黄色溶液，最后定容，保存在棕色试剂瓶中。  = 4 \* GB2 ⑷MS有机物母液（100X） 称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。  = 5 \* GB2 ⑸生长调节剂 单独配制，浓度为1-5 mg/ml（书中为0.5-1mg/ml），一般配成4 mg/ml 。溶解生长素时，可用少量0．5 –1N的NaOH (6-BA)或1ML95%酒精(2，4-D和NAA)溶解，溶解分裂素类用0．5 –1N的HCl加热溶解。  = 3 \* GB1 ⒊配制培养基母液时注意事项： ①某些离子易发生沉淀，可先用少量蒸馏水溶解，在按配方顺序依次混合； ②配制母液时必须用蒸馏水或重蒸馏水； ③药品应用化学纯或分析纯； （三）培养基的制备 1.步骤  = 1 \* GB2 ⑴本次实验要求制作培养基数量1L 培养基成分用量10X大量元素母液100ml100X微量元素母液10ml1000XCoCl2·6H2O 母液1ml1000XCuSO4·5H2O母液1ml100X铁盐母液10ml100X有机物母液10ml蔗糖30g琼脂10g = 2 \* GB2 ⑵根据制作要求计算培养基各种母液的用量。 3、按下列母液的顺序，用量筒或移液管提取母液，放入有一定蒸馏水的烧杯中。 4、加入固化剂：称量10g琼脂，溶解，在电炉上不断加温溶液，并不断搅拌，使琼脂熔化。 5、加糖：放入30g已称量蔗糖，稍加搅拌。 6、加入生长调节物质，激素类型和用量