幽门螺杆菌单克隆抗体的制备及其检测应用.pdfVIP

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2015, Vol.31, No.4 幽门螺杆菌单克隆抗体的制备及其检测应用 马健 1，倪超 1，王海鹰 2，宁正祥 2 （1.华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州 510006）（ 2.华南理工大学轻工与食品学院,广东广州 510640） 摘要：幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)是一种定居于人胃部及十二指肠的微需氧革兰氏阴性菌，其长期感染导致胃炎、胃 及十二指肠溃疡与胃癌。幽门螺杆菌感染主要始于儿童期，其自发性清除非常少见，及早通过检测发现并加以抗生素治疗可有效降低 成人感染率。本文通过体外培养 Hp 标准菌株 ATCC43504，将其裂解液作为抗原免疫 Balb/c 小鼠，通过常规技术路线制备杂交瘤细 胞。经间接 ELISA 法筛选和多次有限稀释法亚克隆得到 21 株稳定分泌抗 Hp 抗原的杂交瘤细胞株，制备腹水并用辛酸硫酸铵联合沉 淀法纯化单克隆抗体。将得到的单克隆抗体在胶体金免疫层析平台上进行配对和样品检测，获得多组灵敏度和特异性相对较高的单克 隆抗体组合，其中以 2-18E1 作为包被抗体，2-9H5 或 2-17E9 作为标记抗体检测细菌培养裂解物的最低限为 25 ng/mL，为 Hp 抗原检 测试剂的研发提供了基础。 关键词：幽门螺杆菌；抗原；单克隆抗体；胶体金免疫层析 文章篇号：1673-9078(2015)4-228-233 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2015.4.037 Development of Monoclonal Antibodies against Helicobacter pylori and Their Applications to Immunological Assays MA Jian1, NI Chao1, WANG Hai-ying2, NING Zheng-xiang2 (1.School of Bioscience Bioengineering, South China University of Technology, Guangzhou 510006, China) (2.School of Light Industry and Food Sciences, South China University of Technology, Guangzhou 510640, China) Abstract: Helicobacter pylori (Hp) is a gram-negative, microaerophilic bacterium found in the human stomach and duodenum, and long-term H. pylori infection is linked to the development of gastritis, gastric and duodenal ulcers, and stomach cancer. H. pylori infection is mainly acquired during childhood, and its spontaneous clearance is rare. Its prevalence among adults can be effectively reduced by early diagnosis and antibiotic thera