建立稳定表达人RANTES基因的夏枯草细胞克隆.pdfVIP

! 卷 # 期 生 物 工 程 学 报 ’()! *’)# #$$% 年 % 月 !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 +,-./ #$$% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 建立稳定表达人 !#$% 基因的夏枯草细胞克隆 曾庆平 冯丽玲 杨瑞仪 陈竹华 （广州中医药大学热带医学研究所生物技术研究室，广州 4!$7$4） 摘 要 为了在中药细胞中表达人源有用基因，以增强其特异药理活性，将克隆自人外周血淋巴细胞（EFG）;H*I 的 HI*5:J 基因经 5 质粒衍生的中间表达载体 KHLMNN 导入携带 KIG77$7 质粒的根癌农杆菌 GFI77$7 菌株中，并采 用叶盘共培养法转化离体培养夏枯草细胞，经 J’C=/6-D 杂交确认 HI*5:J 基因在转化细??基因组中的整合，用 H5 O EPH 扩增、Q6R=6-D 印迹杂交和酶联免疫吸附测定（:GNJI）分析转化细胞中 HI*5:J 基因的表达，以 EFG 的过氧化物 酶活性作为重组 HI*5:J 对细胞趋化性诱导的检测指标。结果表明，HI*5:J 基因已在转基因夏枯草细胞中整合， 并已形成稳定表达 HI*5:J 基因的细胞克隆，为进一步培育具有特异药理活性的转基因夏枯草植株打下了基础。 关键词 HI*5:J，转基因夏枯草，基因表达，趋化活性 中图分类号 S324 文献标识码 I 文章编号 !$$$0%$1（! #$$%）$#0$!120$1 ［ ］ 趋化因子是一类低分子量（2 T !$UV）诱导分泌 录酶活性 !$ 。为了尝试将特异性抗 WN 基因引入 型细胞因子，它们可通过结合细胞表面的趋化因子 中草药以提高其抗 WN 感染的增效作用，我们在人 ［ ］ ［ ］ 受体诱发致炎性免疫应答 ! ，并通过受体与配基的 HI*5:J 基因克隆、测序和表达的基础上 !! O !% ，将 相互作用发挥调节 5 细胞趋化作用和促进血管再生 HI*5:J 基因通过根癌农杆菌中间表达载体 KHLMNN ［ ］ ［ ］ 等重要功能 # ，在治疗自身免疫性疾病 % 、抑制器官 与“解除武装”的 5 质粒 KIG77$7 组成的双元载体 ［ ］ ［ ］ ［ ］ 移植排斥反应 7 和抗肿瘤 4 等方面具有潜在药用价 （FD,-Y Z6.=’-）系统 !7 导入夏枯草培养细胞，形成稳 值。最近发现，趋化因子受体是人免疫缺陷病毒 定表达重组 HI*5:J 基因的传代愈伤组织，以便为 （WC;,D ;;CD’B6X.6D.Y Z-CR，WN）感染人体细胞的 今后利用转基因中草药防治艾滋病打下一定的基 辅助受体，其中 PPH4 是 + 嗜性毒株（H4 病毒）感染 础。 巨噬细胞的辅助受体；P[PH7