分子遗传学 9.遗传物质的结构和信纸 B幻灯片.pptVIP

B型DNA仅仅是众多DNA双螺旋构象中的一种。在外界条件的改变下，双螺旋的构象也会改变。;模型中的碱基配对有何重要性？;; 第三节DNA的结构和性质 ;碱基配对及氢键形成;;腺苷(AR) 脱氧胞苷(dCR);二. 双螺旋结构的构象变异;;Z-DNA的发现： 1972年 Pohl et al 发现 poly(dG-dC)在高盐下旋光性发生改变； 1979年 Wang A.H-J(王惠君), A.Rich对 d(CGCGCG)单晶作X衍射分析提出Z－DNA模型;三 左旋DNA;目前已知DNA双螺旋结构可分为A、B、C、D及Z型等数种，除Z型为左手双螺旋外，其余均为右手双螺旋。 ;; 生化专业术语委员会 建议用俯视图(N9→C1’);核苷的顺反构象;;;Z－DNA存在的条件：;(三)生物学意义;;四、DNA的三级结构; 超螺旋（Supercoied） ;（一）DNA的超螺旋结构;原核生物DNA的三级结构： 绝大多数原核生物的DNA都是共价封闭的环状双螺旋。如果再进一步盘绕则形成麻花状的超螺旋三级结构。 ;超螺旋的定量描叙;;T（Twisting number）：缠绕数，即双螺旋的圈数。 其特点是： (1) 可以是非整数； (2) 是变量； (3) 右手螺旋时T为正值。 超螺旋的量度可以用超螺旋密度λ来表示： λ=（L-T）/T 在天然DNA中， λ约为-0.05 ;（二）三链和四链DNA;三链DNA;H| DNA;;;;鸟嘌呤四聚体;;第四节 DNA的变性与复性;下列因素可导致DNA变性： 高温、 酸、 碱、 尿素、 甲酰胺 DNA变性后物理性质发生的变化： （1）流体力学的性质发生改变：粘度下 降，而沉降速度增加； （2）提高了对紫外线的吸收能力，此称为 增色效应（hyperchromic effect）。 ;双链DNA的A260=1.00（浓度为50μg/ml时，对波长260nm紫外线的吸收能力）； 单链DNA的A260=1.37； 游离碱基或核苷酸的A260=1.60。 解链温度（melting temperature, Tm）或熔点，Tm是A260的升高达到极大值一半时的温度。即是变性温度范围的中点。 影响变性的因素： 外部条件如温度和正离子的浓度。 浓度低于0.4mol/L，单价阳离子增高10倍， T m增加16.6°; 内部条件 GC含量及分子类型 当GC的含量上升1%，则Tm上升0.4℃ 马默多蒂（Marmur-Doty）关系式： Tm = 69.3+0.41(G +C)%， 或 GC%=（Tm-69.3）×2.44 ;复性动力学公式;(1) 单链浓度随着时间的增大而减小； (2）反应速率取决于初始的单链浓度Co； (3) 以反应浓度和COt1/2为座标可绘复性曲线； (4) 通过COt1/2值可测原核生物基因组的大小； 已知大肠杆菌的基因组为4.2x106bp, COt1/2 = 9M.Sec COt1/2 （任何基因组DNA）/9M.sec = 任何基因组大小/4.2X106bp (5)原核生物基因组大小不同，复性曲线也不同； (6) 可用以区分真核生物和原核生物基因组。 ;;;; 单一顺序和重复顺序 复性动力学曲线的区别;;;; 影响复性反应的因素;在复性反应中如何知道单链已经结合成双链了呢？; 第五节 分子杂交; 常用的分子杂交方法;;;;;