APF操作指导.docx

XXXXXXXXXXX医院检验科 实验室作业指导书文件编号：版本/修订号：主题内容抗核周因子（APF）检测生效日期：第页 共页 【产品名称】 中文名称：抗核周因子（APF）检测试剂盒（间接免疫荧光法） 英文名称： Detection Kit for or Anti-perinuclear Factor（Indirect Immunofluorescence） 【包装规格】 30 人份/盒 50 人份/盒 100 人份/盒 【预期用途】 北京和杰创新生物医学科技有限公司生产的抗核周因子（APF）检测试剂盒（间接免疫荧光法），用于定性检测人血清或血浆中的 APF 抗体。 【检测原理】 APF 的检测采用间接免疫荧光法（Indirect Immunofluorescence，IIF），抗原来自正常人脱落的颊粘 膜上皮细胞，在与病人待检血清反应后，加入荧光素（FITC）标记的兔抗人 IgG 抗体，最终于显微镜 下作形态学的定性判断。 【主要组成成分】 序号 组成剂型 规格30 人份/盒50 人份/盒 100 人份/盒 1APF抗原片固体3人份/张10张5 人份/张10张10 人份/张10张2荧光二抗液体1.0mL/支1支1.5mL/支1支3.0mL/支1支3APF 阳性对照液体0.3mL/支1支0.3mL/支1支0.3mL/支1支4APF 阴性对照液体0.3mL/支1支0.3mL/支1支0.3mL/支1支5封片剂液体4mL /支 1支4mL /支 1支4mL /支 1支6PBS 粉剂固体12.2 克 2袋12.2 克 2袋12.2 克 2袋7吐温（Tween-20）液体2mL /支 2支2mL /支 2支2mL /支 2支8盖玻片固体15 片/盒 1盒15 片/盒 1盒15 片/盒 1盒9使用说明书固体1 份1 份1 份 其中APF抗原片主要组分为正常人脱落的颊粘膜上皮细胞；APF荧光二抗主要组分为FITC标记的兔抗人IgG。 【储存条件及有效期】 2-8℃避光保存（抗原片-20℃保存），有效期 12 个月。 【样本要求】 1、人血清或血浆，要求清亮、无沉淀、无黄疸； 2、样本1周以内检测可在4℃条件下贮存； 3、样本1周以上检测需在-20℃条件下冻存，且避免反复冻融。 【检验方法】 准备：从冰箱中取出 APF 抗原片，待其恢复至室温后剪开包装。将洗涤用的 PBS 粉剂用蒸馏水溶解 至 1L，加入 2mL 吐温，混匀后作洗涤和标本稀释用。 2． 稀释：待测血清用洗涤液作 1:20 稀释。 3． 加样：在倒扣板的反应孔内分别加入稀释好的血清和阴阳性对照，25μl/孔。注意：加样 时避免产生气泡。 4． 孵育：将抗原片盖在倒扣板对应的凹槽里，室温孵育 30min。注意：确保每个标本均能够 与抗原基质相接触，而标本之间不相互接触。 5． 洗涤：取出抗原片，用洗涤液轻轻从一侧将反应液冲洗掉，浸泡至洗片缸内，静置 5 min 后，再用蒸馏水冲洗 1 次。 6． 加样：在倒扣板的反应孔内加入 APF 荧光二抗，25μ l/孔。注意：加样时避免产生气泡。 7． 孵育：用纸擦去抗原片周边和反面多余液体后，将抗原片盖在倒扣板对应的凹槽里，室温 孵育 30min。注意：确保每个标本均能够与抗原基质相接触，而标本之间不相互接触。 8． 洗涤：重复步骤 5。 9． 封片：在盖玻片上滴加封片剂。用纸擦干抗原片周边和反面多余液体后，将载片的抗原基 质朝下置于准备好的盖玻片上，完成封片。 10．结果观察：荧光显微镜下观察结果。 【参考值（参考范围）】 APF 阳性细胞细胞核周围出现圆形、均质的特异性绿色荧光颗粒，阴性细胞细胞核周围无特异性荧光颗粒。 【检验结果的解释】 在荧光显微镜下观察，颊粘膜细胞细胞核呈现橘红色，APF 阴性细胞胞浆均匀清亮无荧光颗粒；APF 阳性细胞细胞核周围出现圆形、均质的绿色荧光颗粒，阳性细胞与颗粒的大小和多少无关。 观察同一反应孔，大于 5 个 APF 阳性细胞判为 APF 抗体阳性，5 个以下为可疑，少于 2 个为阴性。 【检验方法的局限性】 该试剂盒只提供 APF 抗