第4章 体内药物分析方法的建立和验证.pptVIP

第四章 体内药物分析方法的建立与验证;第一节 分析方法的设计依据 一.待测药物的理化性质及体内存在状况 1.待测药物的理化性质 1）待测药物的pKa值及其亲脂性、水和有机溶的分配系数 等决定萃取方法 2）药物挥发性判定是否GC检测 3）药物的紫外、荧光、电化学特性决定检测方法 4）药物酸碱、光、热的稳定性 2.待测药物的体内状况; 1）蛋白结合强时，不宜用溶剂萃取 2）原形药物与代谢物共存时，分离度是否良好 3）药物浓度过低采用高灵敏度方法 2.分析测定的目的与要求 1）药代动力学研究 A:测定血中的药物和代谢物 B:要求较宽的线性范围（Cmax/Cmin 1/10-1/20） C:较高的灵敏度（10-9g/ml）、准确度 D:分离度大于1.5 E:常用的仪器HPLC、GC、LC-MS; 2）血药浓度监测 A:要求线性在有效浓度范围内 B:分析方简便、易行、适用于长???和批量样品测定 C:常用的仪器TDX 3.生物样品的类型与样品制备方法 A:生物样品的类型与样品制备与分析方法与有密切关系 B:血浆血清，用蛋白沉淀-溶剂萃取技术，HPLC测定 C:用RIA时样品的预处理可粗放 4.试验室条件 A:试验室设备 B:试验人员; C:验室SOP D:分析软件 第二节 分析方法建立的步骤 一.分析方法的选择 A:样品中的药物浓度是分析方法的首要因素 B:样品中的药物浓度10-6-10-9g/ml C:HPLC法检测限：紫外（UV）1ng；荧光0.1ng；电化学（EDD）0.01ng 二.分析方法的建立 1.检测条件的筛选 A:取标准物质 待测物质；内标物质; B:根据已知的分析方法进行测定 C:根据测定结果确定最佳条件：溶液pH值；温度及时间；试剂用量；色谱条件 2.分析条件的选择 1）空白溶剂试验 A:取待测药物非生物基质溶液，按拟定的方法预处理，分析方 法的特异性 B:空白响应值应尽可能小或可忽略 2）空白生物基质试验 A:取空白生物基质（血、组织匀浆），照空白溶剂试验下操作 B:考察杂质对测定的影响 C:杂质不干扰测定; 3）模拟生物样品试验 A:取空白生物基质加入待测物制成模拟生物样品 B:照空白生物基质试验下操作 C:考察方法的专一性；线性范围；最小检测限；精密度；灵敏度；萃取回收率 4）实际生物样品测定 A:预试 确定实际生物样品与模拟生物样品一致性 B:正式试验 按所建立的分析方法分析 C:比较实际生物样品与模拟生物样品相应特点 D:计算体内药物浓度; 第三节 分析方法的验证内容和要求 一.分析方法的选择 A:用于实际样品分析之前，对所建立的方法的可靠性、可行 性，应使用若干技术指标验证 B:验证步骤 分析方法验证；实际生物样品中药物测定 一）特异性：又称专属性、专一性，与选择性互用 A:是指当有杂质存在时，方法准确测定待测物的能力。通常表 示所检测的信号应属于待测物所特有 B:用来验证该方法所测定的物质是目标物质，且不受非目标物 质的干扰 1.内源性物质的干扰; A:比较待测物的对照品、空白生物基质、模拟生物样品的检测 信号，确证内源性物质对分析物有无干扰 B:比较的内容 Tr；n；T；R 2.代谢产物干扰 比较模拟生物样品和实际生物样品的检测信号（Tr；n；T； R），确证代谢产物对分析物有无干扰 3.配伍用药的干扰 A:比较待测药物、同时服用的药物、空白生物样本、待测药物模拟生物样品、待测药物+同时服用的药物模拟生物样品的检测信号; B:比较的内容 Tr；n；T；R 4.与参比方法的相关性 A:参比方法选择（HPLC、GC） B:同时用两种方法测定不同浓度的系列含药生物样品 C:参比方法测得值为横坐标（x），拟定的方法测得值为纵座 标 （y），求回归方程y=a+bx，r为一致成度；a为拟定方法 受恒定干扰程度；b为拟定方法受比例干扰程度。 D: r=1 a=0 b=1 两种方法一致 二）标准曲线与线性范围 A:又称校正曲线、工作曲线。是指生物样品中药物浓度与所测 定的该药物的检测信号的相关性，通常用回归方程评价。; B:大多数方法的标准曲线为线性模式。回归方法为最小二乘法 和加权最小二乘法 C:生物样品中药物浓度为自变量（x），检测信号为因变量（y），回归方程为y=a