各類層析色谱分析技术完全讲解.ppt

层析技术;第一节 层析概述; 层析法也称色谱法(chromatography)，是1906年俄国植物学家Michael Tswett发现并命名的。他将植物叶子的色素通过装填有吸附剂的柱子，各种色素以不同的速率流动后形成不同的色带而被分开，由此得名为“色谱法”。 后来无色物质也可利用吸附柱层析分离。 ; 1941年，英国生物学家Martin和Synge首先提出了色谱塔板理论，为后来各种色谱技术的发展奠定了基础。 1944年出现纸层析。以后层析法不断发展，相继出现气相层析、高压液相层析、薄层层析、亲和层析、凝胶层析等。 层析法是利用混合物中各组分物理化学性质的差异（如吸附力、分子形状及大小、分子亲和力、分配系数等），使各组分在两相（一相为固定的，称为固定相；另一相流过固定相，称为流动相）中的分布程度不同，从而使各组分以不同的速度移动而达到分离的目的。 层析技???是一种分离技术，是混合物最有效的分离、分析方法。;经典色谱（offline);Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;现代色谱（online); 层析技术的原理 ; ;二、层析法的特点;层析应用范围;分析的参数;按层析原理分类（一） ;名称;离子交换层析：利用不同组分对离子交换剂亲和力的不同。;按两相所处状态分类 ;按操作形式不同分类 ; 纸上层析是用滤纸作为支持剂（载体）的一种色层分析法，这种方法的基本原理一般认为主要是利用混和物中各组分在流动相和固定相间的分配比的不同而使之分离。 纸上层析可用于化学性质相近的混和物的分离，特别适宜于微量物质的分离和鉴别。而且使用的仪器简单，操作比较容易，重现性好。 ;三、层析前蛋白质处理;1、盐析法;2、等电点沉淀;3、有机溶剂沉淀;四、层析基本操作过程;1、柱层析的L/d比值;2、洗脱装置; ; ;3、结果检测;结果保存 薄层层析纸层析 照相保存or 扫描仪转为图形or 积分仪变成数据 柱层析 检测器、记录仪和积分仪处理;4、层析装置的仪器化;伯乐公司duoflow中高压层析仪; 液相层析技术;概况;液相层析仪;组份收集器;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;层析柱管;填充技术;检测器;固定相;层析介质与生物大分子的关系;层析介质的性能;流动相; 第一节 吸附层析;吸附层析;原理;吸 附;吸附种类;吸附剂的选择;吸附剂;吸附介质的分类及其性质（一）;吸附介质的分类及其性质（二）;硅 胶; ;活化 加热至100～110℃，除去硅胶表面因氢键所吸附的水分 当温度升高至500-1000℃时，硅酰基脱水缩合转变为硅氧烷键，不再有吸附剂的性质 再生: 提高其吸附能力。 一般可用乙醇或甲醇洗涤，除去溶剂，110℃烘干活化处理;吸附介质的分类及其性质（三）; ; ;吸附介质的分类及其性质（四）;活性炭;吸附介质的分类及其性质（五）;吸附介质的分类及其性质（六）;吸附剂的选择;上样剂和洗脱剂的选择;选择原则;分离过程--吸附过程;分离过程—洗脱过程; 色谱流出曲线及有关术语 流出曲线和色谱峰 ;基本术语 ; 色谱峰顶点与基线之间的垂直距离，以h表示，;3、区域宽度;4. 死时间t0; ;6. 保留时间tR;从进样开始到被测组份在柱后出现浓度极大点时所通过的流动相体积。保留体积与保留时间tR的关系如下：  VR = tR·F0 ;某组份的保留时间扣除死时间后称为该组份的调整保留时间，即 tR′ = tR-t0; 某组份的保留体积扣除死体积后，称该组份的调整保留体积，即 VR′ = VR- V0; ;分配系数:在一定温度和压力下，组分在固定相和流动相之间分配达平衡时的 浓度之比值 。 分配系数大的组分在固定相上的溶解或吸附能力强，因此在柱内的移动速度慢。反之，分配系数小的组分在固定相上的溶解或吸附能力弱，在柱内的移动速度快。 分配系数体现了不同组分的热力学性质的不同,其大小反映了组分在固定相上的溶解——挥发 或 吸附——解吸