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第十四章 酶类药物;酶 药用酶是用于预防、治疗、诊断疾病的一类酶制剂。 生物体内的各种生化反应几乎都是在酶的催化作用下进行的，当酶的生物合成受到影响或酶的活力受到抑制，生物体的代谢受阻就会出现各种疾病。此时，若给机体补充所需要的酶，使代谢障碍得以解除，从而达到治疗和预防疾病的目的。;药用酶制剂，早期主要用于治疗消化道疾病、烧伤及感染引起的炎症。现在，国内外已广泛用于多种疾病的治疗，其制剂已超过700余种。 促进消化酶类 消炎酶类 与治疗心脑血管疾病有关的酶类 抗肿瘤的酶类 与生物氧化还原电子传递有关的酶 其他药用酶;药用酶的来源和生产;生化制备法; 2.生物材料的预处理 材料选定通常要进行处理。要剔除结缔组织及脂肪组织。如不能立即进行实验，则应冷冻保存。 酶蛋白在细胞内外的分布有三种情况：—是释放到细胞外的酶，叫胞外酶；二是游离在细胞内的酶．叫溶酶；三是牢固与膜或细胞颗粒结合在—起的，叫结酶，后二者合称胞内酶。; 由于酶蛋白分布不同，提取方法有所差异。 微生物胞外酶，用盐析，或有机溶剂沉淀等从发酵液中沉淀酶，制成酶泥。 胞内酶需收集菌体，经破细胞后提取。 其中结酶还有个打断酶蛋白和细胞颗粒结合的问题。动植物细胞，也有打破细胞的问题，对动物材料，应剔除结缔组织、脂肪组织等；对植物材料如种子应去壳．以免单宁等物质着色污染。;a、机械处理 用绞肉机绞，成为组织糜。许多酶可以从较粗的组织糜中提取出来，但不能太粗。选择孔径，先粗后细。 用绞肉机一般细胞并不破碎 。有的酶必须细胞破碎后才能有效地提取，在实验室常用的是玻璃匀浆器和组织捣碎器。 工业上用高压匀浆机。;b、反复冻融 冷到-10℃左右，再缓慢溶解至室温，如此反复多次。由于细胞中冰晶的形成，及剩下液体中盐浓度的增高，能使细胞中颗粒及整个细胞破碎，从而使某些酶释放出来。 c、丙酮粉 组织经丙酮迅速脱水干燥制成丙酮粉，不仅可减少酶的变性，同时因细胞结构成份的破碎使蛋白质与脂质结合的某???化学键打开，促使某些结合酶释放到溶液中。 常用的方法是：将组织糜或匀浆悬浮于0.0lmol／L，pH6.5的磷酸缓冲液中，在0℃下一边搅拌，一边徐徐倒入10倍体积的-15℃无水丙酮内，10分钟后，离心过滤取其沉淀物，反复用冷丙酮洗几次，真空干燥即得丙酮粉。丙酮粉在低温下可保存数年。;d、微生物的预处理 要是酶是胞外酶，则可除去菌体后再直接从发酵液中吸附提取酶。但对胞内酶则需将菌体细胞破壁，制成无细胞的悬液后再行提取。 通常用离心或压滤获得菌体。 絮凝剂： (1)絮凝剂中和了悬浮粒子表面上的电荷(菌体细胞表面上亦存在着羧基和氨基，故带有电荷)，最终导致了这些粒子的絮凝。 (2)絮凝剂的包埋或吸附作用，把菌体及其它不溶性粒子机械地吸附并包埋在其中。 菌体用生理盐水洗涤除去培养基后，应深冻保存。;3、酶的提取 a、水溶液法 常用稀盐溶液或缓冲液提取。 组织糜、匀浆、细胞颗粒、丙酮粉 温度 温度通常控制在0一4℃左右.如果酶比较稳定时，可以例外。如胃蛋白酶可在37℃F保温抽提。 pH，首先考虑酶的稳定性。选用pH不应超过酶的PH稳定范围。其次，从抽提效果出发，最好远离待抽提酶的等电点。也就是说，酸性蛋白宜用碱性溶液抽提；碱性蛋白宜用酸性溶液抽提。第三，在某些情况下，抽提还兼有切断酶与细胞内其它成分间可能有的联系，从这点出发，选用pH 4—6为佳。 ;盐， 大多数蛋白质在低浓度的盐溶液中有较大的溶解度。所以，抽提液一般采用等渗溶液。最普通的为0.020—0.050mol/L的磷酸缓冲液, 0.15mol/L NaCl等。据报道，少数情况下用水抽提亦佳,这可能与低渗破坏细胞结构有关. 抽提液用量 抽提液用量常采用原料量的1—5倍。有时，为了抽提效果好些需要反复抽提时．抽提溶液比例可能大些. ;b、有机溶剂法 某些结合酶如微粒体和线粒体膜的酶，由于和脂质牢固结合，为此必须除去结合的脂质，且不能使酶变性，最常用的有机溶剂是丁醇。 正丁醇兼有高度的亲脂性和亲水性(特别是磷酸盐)，能破坏蛋白间的结合使酶进入溶液，如琥珀酸脱氢酶。 c、表面活性剂法 表面活性剂能与蛋白质结含而分散在溶液中，故可用于提取结合酶。 如胆脂酸盐、 Triton、Tween、Teepol、十二 烷基磺酸钠等 ; 抽提后的细胞残渣或固体成分可用离心或过滤除上，在离心时，加入氢氧化铝凝胶或磷酸