原创力文档- 1、本文档共51页，可阅读全部内容。
- 2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
基因工程技術
基因工程技术;Jackson, Symons,and Berg (1972)
– generated first
recombinant DNA molecules
Cohen and Boyer (1973)
– produced first plasmid vector capable of
being replicated within a bacterial host
vectors – carriers of foreign DNA
;定义：;基因克隆(gene cloning )：
是指目的基因与载体DNA连接构成的DNA重组体在受体细胞内进行复制、扩增的技术。;应用：;基因工程基本步骤：;基因工程流程示意图;构建重组分子（连接）;目的基因片段来源：;目的基因来源选择：;PCR：;片断的回收与纯化;载体：;克隆载体(cloning vector)
用于在受体细胞中进行目的基因扩增的载体。一般具有较低的分子量、较高的拷贝数和松弛型复制子。主要由细菌质粒或与其它质粒、噬菌体及真核生物病毒的DNA重组构建（PBR322）。
表达载体(expression vector)
使目的基因在宿主细胞中得以表达的载体。可将重组体DNA导入适合的受体细胞，使所载荷的目的基因能够复制、转录和翻译（pCDNA3）。
;穿梭载体(shuttIe vector);质粒载体;克隆载体: PBR322 ;Evaluation only.
Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0.
Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;;TA 克隆;TOPO-TA;原核 His-tag: pQE系列(Qiagen), pET22(Novagen) GST-tag: pGEX系列(Pharmacia);pCDNA3系列 (Invitrogen)，;pFLAG-CMV系列(Sigma) ;Tet-On/Tet-Off Expression Systems ;DNA分子的体外连接：方法 ;两种情况：;碱性磷酸酶处理：;平头末端：;Eco RⅠ; 加同聚物尾：
载体与片段没有共同的粘性末端时，可直接通过末端转移酶分别接上poly（dA）和poly（dT），然后退火，直接转化，分子间空缺部分可以在宿主体内修复。
同尾酶(xho I ;Sal I)
;连接策略：;选择连接位点： ;连接浓度： ;连接反应：;连接酶：两种;其他酶：末端修饰酶;重组子导入受体细胞：;重组子导入受体细胞：途径;转化;感受态菌制备;氯化钙法：原理;重组子的筛选：;插入失活：;α互补现象： 蓝白斑筛选;
42℃90s,+900ul
LB,37 ℃45min
;阳性克隆的鉴定：;碱裂解法 ;试剂作用：;初步鉴定;后续：
文档评论（0）