灵芝锰过氧化物酶毕赤酵母工程菌培养条件的优化.PDFVIP

第二军医大学学报 　２０１６年８月第３７卷第８期　　犺狋狋狆：／／狑狑狑．犪犼狊犿犿狌．犮狀 ＡｃａｄｅｍｉｃＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｅｃｏｎｄＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ａｕｇ．２０１６，Ｖｏｌ．３７，Ｎｏ．８ ·９５５· ＤＯＩ：１０．１６７８１／ｊ．０２５８８７９ｘ．２０１６．０８．０９５５ ·论　著· 灵芝锰过氧化物酶毕赤酵母工程菌培养条件的优化 徐　慧１，郭梦圆１，靳　通１，高艳华１，路慧丽２，李　伟３，周选围１，２ １．上海交通大学农业与生物学院植物生物技术研究中心，上海２００２４０ ２．上海交通大学药学院细胞工程及抗体药物教育部工程研究中心，上海２００２４０ ３．上海交通大学上海系统生物医学研究中心，上海２００２４０ 　　［摘要］　目的　研究毕赤酵母生产重组灵芝锰过氧化物酶（ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ犌犪狀狅犱犲狉犿犪犾狌犮犻犱狌犿 ｍａｎｇａｎｅｓｅｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ， ｒＧｌＭｎＰ）的最优培养条件。方法　在单因素实验基础上，采用中心组合设计和响应曲面法对ｒＧｌＭｎＰ工程酵母产ｒＧｌＭｎＰ的 发酵条件进行优化，探讨初始ｐＨ、温度、甲醇浓度和血红素浓度对重组毕赤酵母生产的ｒＧｌＭｎＰ的酶活力的影响，分析上述４ 个因子的交互作用及其最佳水平范围，并验证模型的有效性。结果　初始ｐＨ、温度、甲醇浓度和血红素浓度对毕赤酵母生产 ｒＧｌＭｎＰ的酶活力有显著影响；毕赤酵母生产ｒＧｌＭｎＰ最优的培养条件为：初始ｐＨ５．５、诱导温度３０℃、甲醇浓度１．５％以及血 红素浓度１．０ｍｍｏｌ／Ｌ。结论　本研究为利用毕赤酵母工程菌大规模生产ｒＧｌＭｎＰ奠定了基础。 ［关键词］　灵芝；锰过氧化物酶；毕赤酵母；优化；响应曲面法 　　［中图分类号］　Ｒ９１５．１２　　　［文献标志码］　Ａ　　　［文章编号］　０２５８８７９Ｘ（２０１６）０８０９５５０８ 犗狆狋犻犿犻狕犪狋犻狅狀狅犳犳犲狉犿犲狀狋犪狋犻狅狀犮狅狀犱犻狋犻狅狀狊狅犳狉犲犮狅犿犫犻狀犪狀狋犘犻犮犺犻犪狆犪狊狋狅狉犻狊犳狅狉狋犺犲狆狉狅犱狌犮狋犻狅狀狅犳犌犪狀狅犱犲狉犿犪 犾狌犮犻犱狌犿 犿犪狀犵犪狀犲狊犲狆犲狉狅狓犻犱犪狊犲 ＸＵ Ｈｕｉ１，ＧＵＯ Ｍｅｎｇｙｕａｎ１，ＪＩＮＴｏｎｇ１，ＧＡＯＹａｎｈｕａ１，ＬＵ Ｈｕｉｌｉ２，ＬＩＷｅｉ３，ＺＨＯＵＸｕａｎｗｅｉ１，２ １．ＰｌａｎｔＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ，ＳｈａｎｇｈａｉＪｉａｏｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＳｃｈｏｏｌｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅａｎｄＢｉｏｌｏｇｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２００２４０， Ｃｈｉｎａ ２．ＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｏｆＣｅｌｌａｎｄＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃＡｎｔｉｂｏｄｙｏｆ ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，ＳｈａｎｇｈａｉＪｉａｏｔｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２００２４０，Ｃｈｉｎａ ３．ＳｈａｎｇｈａｉＣｅｎｔｅｒｆｏｒＳｙｓｔｅｍＢｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ，ＳｈａｎｇｈａｉＪｉａｏｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２００２４０，Ｃｈｉｎａ 　　［犃犫狊狋狉犪犮狋］　犗犫犼犲犮狋犻狏犲　Ｔｏｓｅａｒｃｈｆｏｒｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒｐｒｏｄｕｃｉｎｇｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ犌犪狀狅犱犲狉犿犪犾狌犮犻犱狌犿 ｍａｎｇａｎｅｓｅｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ （ｒＧｌＭｎＰ）ｂｙ 犘犻犮犺犻犪狆犪狊狋狅狉犻狊．犕犲狋犺狅犱狊 Ｂａｓｅｄ ｏｎｔｈｅｓｉｎｇｌｅｆａｃｔｏｒｉａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ａｎ ｏｐｔｉｍｕｍ ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｆｏｒｒＧｌＭｎＰｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｂｙｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ犘犻犮犺犻犪狆犪狊狋狅狉犻狊ｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｔｈｒｏｕｇｈａｃｅｎｔｒａｌｃｏｍｐｏｓｉｔｅｄｅｓｉｇｎ （ＣＣＤ）ａｎｄｒｅｓｐｏｎｓｅｓｕｒｆａｃｅｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ（ＲＳＭ）ｉｎｔｈｅｐｒｅｓｅｎｔｗｏｒｋ．ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｉｎｉｔｉａｌｐＨ，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｆ ｍｅｔｈａｎｏｌａｎｄｈｅｍｅｏｎｔｈｅｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖ