生物技術之層析技术.ppt

Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;引 言;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;*;*;*;*;*;*;*;*;*;(1)分辨力高 (2)分析效率高 (3)灵敏度高 (4)操作简便，应用广泛 局限性：在定量分析中需要纯制得标准物质；不能精确地解决物质的化学结构问题;气-固(GSC) 气-液(GLC);2.按层析的原理可分为;3.按操作形式不同;*;（一）凝胶层析; 凝胶层析柱中装填着许多直径小于1mm的凝胶颗粒，颗粒内部不是实心的，而是三维多孔网状结构。;凝胶层析法;在洗脱过程中，混合物样品流经凝胶柱，大分子物质因其直径大于凝胶网孔的孔径，不能进入凝胶颗粒内部，只能沿着凝胶颗粒的空隙随溶剂流动，流程短而移动速度快，先流出层析柱；小分子组分由于其分子直径小于网状结构的孔径，可进入凝胶颗粒内部，流程长而移动速度慢，比大分子物质后流出层析柱，分子大小不同的混合物因此得到分离。;凝胶层析;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;;2.凝胶层析的介质;*;结构： 基本骨架：葡聚糖（dextran） 交联剂：3-氯代-1,2-环氧氯丙烷使葡聚糖之间通过醚键交联聚合而成的三维空间网状结构。;*;*; 由丙烯酰基葡聚糖与甲叉双丙烯酰胺共聚生成的刚性凝胶，化学性质稳定，有良好的机械性能，可高温消毒，分辨率高，广泛用于蛋白质的分离与提纯。; 一种由Phamarica公司生产的新型凝胶过滤介质，有高交联度多孔琼脂糖与葡聚糖共价结合而成，是目前分辨率和选择性最高的凝胶过滤介质。其物理化学性质稳定，能耐受强去垢剂与变性剂的影响，可高温消毒，流速快，分辨率高。现有Superdex30 Superdex75 Superdex200三种型号。; 生物大分子的纯化 分子量测定 脱盐及去除小分子杂质 ;凝胶层析的优点 凝胶是一种不带电荷的惰性载体，结构稳定。 操作条件较温和。 样品得率高，重复性好，可进行大量样品的分离纯化。;（二）离子交换层析; 离子交换层析是用离子交换剂（具有离子交换性能的物质）作固定相，利用它与流动相中的某种离子进行可逆的交换性质来分离离子型混合物的层析方法。 ——依据各种离子或离子化合物与离子交换剂的结合力不同而进行分离纯化。 ;离子交换层析的基本原理;根据可交换离子的性质，离子交换剂分为阳离子交换剂和阴离子交换剂。;离子交换层析的基本原理示意图;流动相中，不同离子化合物带电荷数量不同，与离子交换剂相互作用的强弱也不同。 因此，可以通过提高流动相中的离子强度或改变pH值得方法，将结合在离子交换剂上的反离子从离子交换柱上依次洗脱下来，达到分离纯化的目的。;带电荷量少，亲和力小的先被洗脱下来； 带电荷量多，亲和力大的后被洗脱下来。; 两性离子如蛋白质、酶类、多肽和核苷酸等物质与离子交换剂的结合力，主要取决于它们的物理化学性质和在特定pH条件下呈现的离子状态。当pH低于等电点(pI)时，它们带正电荷能与阳离子交换剂结合；反之，pH高于pI时，它们带负电荷能与阴离子交换剂结合 。pH与pI的差值越大，带电量越大，与交换剂的结合力越强。 离子交换层析之所以能成功地把各种无机离子、有机离子或生物大分子物质分开，其主要依据是离子交换剂对各种离子或离子化合物有不同的结合力。;离子交换层析的基本原理;2.离子交换剂;离子交换剂对溶液中不同离子具有不同的结合力，这种结合力的大小是由离子交换剂的选择性决定的。 强酸性(阳性)离子交换剂对H＋的结合力比对Na＋的小； 强碱性(阴性)离子交换剂对OH－的结合力比对Cl－的小得多； 弱酸性离子交换剂对H＋的结合力远比对Na＋的大； 弱碱性离子交换剂对OH－的结合力比对Cl－的大。;;3.洗脱;4.离子交换层析的特点;Ev