第七章病理制片选编.ppt

病理技术在医学科研中的应用; 病理学科是一门基础与临床之间起着桥梁作用的重要学科，病理研究方法在技术工作上又是多方面的，有尸体解剖、大体标本的制作、制片（石腊切片、冰冻切片、半薄切片、超薄切片等）、组织化学方法，免疫酶标技术、荧光技术、摄影技术等。; 作为实验技术人员大量的工作是病理制片技术，即常规病理切片、特殊染色，以供教学、科研、临床活检诊断之用。 ;第一章 病理技术的应用范围;;第一节 组织制片的概述; 组织制片技术的应用，从1665年由HOOk发现细胞开始，已有300多年的历史。最早应用冰冻切片；随后又进一步利用石蜡的硬度，以石蜡包埋组织，制成石腊切片；后来又利用明胶、火棉胶、碳蜡和塑料等物质的韧性，以其包埋组织而制作切片。; 组织制片技术随着生物学和医学的发展而发展。切片染色方法可以显示不同细胞和组织形态，以及细胞和组织中某些化学成分含量的变化。因此，组织制片技术是教学、医学和科研中不可缺少的一个组成部分。;第二节 制片的种类; 1、组织切片法;2、组织非切片法;第三节 制片方法的程序; 1、取材与固定;2、洗涤与脱水;3、透明与浸蜡（透蜡）;4、包埋与切片;5、贴片（展片、捞片）和染色;6、封 片;二、 组织切片的主要程序;2．标本切开或取厚块→组织固定（冰冻切片法）→冰冻切片→粘片→乙醇固定及水洗→常规染色→脱水→透明→树胶封片。;第二章 固定、固定液和取材;第一节 组织固定方法;1、固定的意义;2、组织固定的目的;4）固定剂兼有硬化作用，使组织硬化增加组织硬义，便于制片。 5）防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有形态结构。 6）经过固定的组织，能对染料产生不同的亲和力而着色清晰，便于辩认。 ; 由于固定的目的是在于尽量使组织和细胞保持与生活时相仿的成分和形态。因此，固定的组织愈新鲜愈好，固定组织时，应使用足量的固定液，其固定液的量一般不少于组织块总体积的4倍以上。;3、固定剂的性质;1）迅速渗入组织而固定原生质，使短期解剖的组织形态不至于有较大变化。2）固定液有相当的渗透??，对组织各部分的渗透力相等，可使组织内外完全固定。3）使组织细胞中不至于因固定引起人为的改变。4）在凝固原生质以后，增加细胞对于各种穿透的抵抗力，不至于因以后的处理而使固定后的原生质变形。;5）尽可能避免使组织膨胀或收缩。6）能使细胞内的成分（蛋白质）凝固或沉淀下来。7）增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别。增加媒染作用和染色能力。8）使组织变硬，适于制片，但又不使材料太坚硬而松脆。9）使组织充分固定，便于保存。;第二节 介绍几种常见固定液; 固定剂有简单固定剂（液）和混合固定剂两类。作为较好的固定液，首先有强渗透力，能迅速地渗入组织内部；其次不会使组织过渡收缩或膨胀，并能使组织内易观察的成分得以凝固为不溶性物质；最后能使组织达到一定硬度，获得较佳的折光率和对某些染料具有较强的亲和力。;一、简单（单纯）固定液1、甲醛（Ｆormeldehyde） 甲醛（福尔马林）为一种无色气体，溶于水成为甲醛水溶液，甲醛是一种还原剂，极易挥发旦有强烈刺激性气味。在平时常用的甲醛浓度为10%，这是指以10ml甲醛加入90ml的水配成的，此液实际上只有4%的甲醛。; 甲醛水溶液渗透力强，固定均匀，对组织收缩较少。但经乙醇脱水时收缩很大，它能使组织硬化并增加组织的弹性。固定厚度适当的组织，较为适宜。因早醛为非沉淀性固定剂，它不能使白蛋的及抗蛋白沉淀；但可与蛋白质化合，对脂肪，神经，及髓鞘的固定很好，也可固定高尔基体、线粒体，又是复糖的保存剂，使肝糖元变为微细的颗粒团。 使用甲醛固定的陈旧组织，以多血的赃器如脾、肝等，较易发生黑色或棕黑色的沉淀，称甲醛色素。;2、乙醇（Ｅthyl alcohol） 乙醇为无色液体，可以水在任何比例下混合。它是一种还原剂，很易被氧化为乙醛，在变为醋酸，所以不能与铬酸、重铬酸钾、锇酸等氧化剂混合。 用于固定时以80%—95%的浓度为好，它具有固定硬化脱水等多种作用。高浓度乙醇固定的组织硬化显著，组织在高浓度乙醇中留置过久，易变脆，也使组织收缩明显，均可缩小原组织体积的20%。因70%乙醇可较久的保存组织。; 另外，乙醇其渗透力较弱，能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白。因此，乙醇除固定作用外，还具有硬化和脱水作用，所以它在制片过程中用途很大。;3、醋酸（Ａcetic acid）  醋酸又名乙酸，是带有刺激味的无色液体，因在室温15℃时常结成冰状——冰醋酸。;特性：（1）在15℃时成冰状结晶，有刺激性味，可溶水、乙醇一般配成5％