第七章生物技术选编.ppt

第七章 生物技术;一、生物技术简介;1 生物技术发展简史;生物技术发展简史－现代生物技术阶段;2、 Biotechnology;基因工程、细胞工程、发酵工程、蛋白质（酶）工程此外还有基因诊断与基因治疗技术、克隆动物技术、生物芯片技术、生物材料技术、生物能源技术、利用生物降解环境中有毒有害化合物的技术 直接相关联的学科：分子生物学、微生物学、生物化学、遗传学、细胞生物学、化学工程学、医药学等。 对人类和社会生活各方面影响最大的生物技术领域：农业生物技术、医药生物技术、环境生物技术、海洋生物技术;基因工程是指在微观领域（分子水平）中，根据分子生物学和遗传学原理，设计并实施一项把一个生物体中有用的目的DNA(遗传信息)转入另一个生物体中，使后者获得新的需要的遗传性状或表达所需要的产物，最终实现该技术的商业价值。; 稀少珍贵的蛋白质药物; 畜牧业中的应用; 种植业中的应用;二、基因工程;Genetic engineering;转基因鱼;有关转基因鱼对生态环境的影响，其担心的集中点 ;2.1 What is gene and what is it used for?;真核生物;2.2 Central Dogma （中心法则）;2.3 Genetic engineering;2.4 基因工程的典型步骤;基因工程细胞构建的必要条件;2.5 Enzyme;2.5.1 Restriction endonucleases;平末端;Nomination;(1)Some common restriction endonucleases, their sources and recognition sites;(2)反应条件;（3）酶的储存;2.5.2 DNA ligase;2.5.3 其他常用修饰酶; 应用：DNA分子的体外合成、定点突变、DNA探针的标记、DNA序列测定、基因文库的构建、聚合酶链反应（PCR）等等 ;（2）T4多核苷酸激酶 催化ATP的γ－磷酸集团转移到DNA或RNA的5`-OH 上。 用途：化学合成的寡核苷酸片段的5`-OH上加上磷酸集团，以便进行化学合成基因的拼连; （3）碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase） 作用：去除DNA、RNA、NTP和dNTP的5`磷酸根。 在基因克隆时可去除载体DNA片段的 5`－P.以防载体自身环化;2.6 Vector ;2.6.1 Plasmid;（1）Selective marker 对氨苄青霉素有抗性的质粒，一般写作Ampr,而对该药敏感的质粒则写作Amps (2) General purpose plasmid vectors pBR322：4363bp,Ampr+Tetr pUC19:2686bp ,IPTG ;pBR322;筛选重组子的??意图;pUC19 and pUC18;;IPTG(异丙基硫代半乳糖苷);利用菌落颜色筛选重组子;Shuttle vector;2.6.2 λ-phage ;裂解途径;（2） λ-phage 的特点 优点：可携带较长的外源DNA片段，最长达18~22kb；重组DNA分子包装成噬菌体颗粒后具有更高的转染能力；重组的噬菌体容易筛选和储存 缺点：只能侵染一些特殊的大肠杆菌，这些菌株能容忍I/E缺失的噬菌体；重组噬菌体DNA太长（52kb)或太小（38kb)都无法有效地包装进噬菌体的头部;2.6.4 YAC;2.7 目的基因的制备的方法;2.7.1 Gene library;;Genomic libraties;cDNA libraties;2.7.2 PCR;PCR扩增目的基因片段; PCR技术的发明;改进的PCR方法;应用;2.7.3 DNA的化学合成;2.8 基因导入技术;2.8.1 基因导入微生物细胞;2.8.2 基因导入动植物细胞;2.9 阳性克隆的筛选与鉴定;原位杂交(in situ hybridization);杂交基本步骤;;;（1）提取总DNA （2）酶解 （3）电泳 （4）转移到滤膜 （5）变性解链 （6）DNA探针及杂交 （7）洗脱 （8）放射自显影 （9）比较分析;Southern杂交分析示例;三、蛋白质工程;“后基因组时代”将是“蛋白质组学时代”，即从对基因信息的研究转向对蛋白质信息的研究，包括研究蛋白质结构、功能与应用及蛋白质相互关系和作用。 蛋白质工程就是在对蛋白质的化学、晶体学、动力学等结构与功能认识的基础上，对蛋白质人工改造与合成，最终获得商业化的产品。;基因工程是通过基因操作把外源基因转入适当的生物体内，并在其中进行表达，它的产品还是该基因编码的天然存在的蛋白质 蛋白质工程则更