第三章沉淀选编.ppt

第三章 沉淀;主要内容;第一节 蛋白质表面特性;第二节 蛋白质沉淀的方法; 盐析沉淀法：蛋白质在高离子强度溶液中溶解度降低，发生沉淀的现象。;盐析沉淀原理: 由于加入大量的中性盐破坏了蛋白质的水化膜、中和其所带的电荷从而使蛋白质分子聚集而沉淀析出。;lgS=β-Ksμ ;影响盐析的因素; 不同的蛋白质分子，由于其分子表面的极性基团的种类、数目以及排布的不同，其水化层厚度不同，故盐析所需要的盐浓度也不一样，因此调节蛋白质的中盐浓度，可以使不同的蛋白质分别沉淀。如：;常用的盐析剂是硫酸铵，因为它的盐析能力强，在水中的溶解度大，价格便宜，浓度高时也不会引起蛋白质活性丧失。 盐析沉淀的蛋白质仍保持天然构象，即仍有活性。 蛋白质用盐析方法沉淀分离后，还需要脱盐才能进一步精提纯。脱盐常用透析法。;透析——只用于除盐类和小分子杂质;透析——只用于除盐类和小分子杂质;超滤——除小分子杂质，分离、浓缩蛋白质;2 等电点沉淀;3 有机溶剂沉淀法;4 非离子型聚合物沉淀法;5 聚电解质沉淀法;6 多价金属离子沉淀法;7 亲和沉淀法;亲和过程提供了一个从复杂混合物中分离提取单一产品的有效方法。 ①初始阶段，将一个目标蛋白质与键合在可溶性载体上的亲合配位体络和形成沉淀； ②所得沉淀物用一种适当的缓冲溶液进行洗涤，洗去可能存在的杂质； ③用一种适当的试剂将目标蛋白质从配位体现中离解出来。;作 业