重组人 gdnf在人乳腺肿瘤上皮细胞中表达的研究.pdfVIP

一 16一 江苏农业科学 2015年第43卷第 2期 张学明，丁海麦，席海燕，等．重组人gdnf在人乳腺肿瘤上皮细胞中表达的研究[J]．江苏农业科学，2015，43(2)：16—19 doi：10．15889~．issn．1002—1302．2015．02．006 重组人 gdnf在人乳腺肿瘤上皮细胞中表达的研究 张学明，丁海麦，席海燕，李 斌，张晶晶，虞 飞 (内蒙古科技大学包头医学院，内蒙古包头 014040) 摘要 ：为了在人乳腺肿瘤上皮细胞系 中表达重组人胶 质细胞源性神经营养因子 (GDNF)，本研究构建 了牛 一 casein基因启动子驱动的重组人 GDNF乳腺上皮细胞特异表达载体，用脂质体介导法将其导人人乳腺肿瘤上皮细 胞系 Bcap一37细胞中，经G418抗性筛选8～10 d后，分离稳定表达红色荧光蛋白的转染细胞，PER鉴定转基因细胞， 用催乳素、胰岛素及氢化可的松诱导培养转基因细胞，RT—PCR和Western Blot检测重组人GDNF的表达分泌。结果 表明：重组人GDNF乳腺上皮细胞特异表达载体被成功构建，转染Bcap一37细胞后，稳定整合到细胞染色体申，转基 因细胞经激素诱导后能够表达分泌糖基化的 GDNF，为高效制备与天然人 GDNF蛋白结构完全一致的重组人 GDNF 蛋白用于帕金森病临床治疗研究奠定了基础。 关键词：人乳腺肿瘤上皮细胞系；生物反应器；胶质细胞源性神经营养因子；表达载体；帕金森病 中图分类号：Q789 文献标志码：A 文章编号：1002—1302(2015)02—0ol6一o4 帕金森病(Parkinson’S disease，PD)是老年人群中常见的 一 种神经元退行性疾病，其临床表现主要是以静止性震颤、运 动迟缓、肌僵直和姿势平衡障碍为特征。PD的病理特征主要 是中脑黑质多巴胺能神经元退行性丧失 ，导致纹状体中多巴 胺含量显著降低⋯。目前用于 PD临床治疗的常规药物主要 有复方左旋多巴、多巴胺受体激动剂、抗胆碱能药物等，这些 药物能够暂时减轻或缓解症状，但不能阻止 PD的进程，且长 期用于 PD治疗会出现多种并发症 ；因而，研制开发新的药 物用于 PD的有效治疗是非常必要的。 收稿 日期：2014—07—23 基金项目：国家 自然科学基金 (编号)；内蒙古高等学校科 学研究项 目(编号：NJ10184)。 作者简介 ：张学明(197O一)，男，内蒙古包头人，博士，副教授，主要研 究方向为重组药物蛋白。E—mail：byzhxm@126．eom。 胶质细胞源性神经营养因子( ial cell line—direved neu． rotrophie factor，GDNF)是由 Lin等于 1993年在 B49神经胶质 瘤细胞中分离纯化出的一种分泌性糖蛋白，属于 TGF—B超 家族成员 。研究表明，GDNF对多巴胺能神经元具有营养 及保护作用 ，应用 GDNF治疗帕金森病已进入二期临床研 究 。然而由于 GDNF在人和动物体中含量低，从动物组织 中分离纯化 GDNF用于疾病动物模型和临床实验研究是不现 实的；因而，应用转基因技术大量生产重组 GDNF用于疾病动 物模型和临床研究具有潜在的重大社会效益和经济效益。 本研究构建了牛JB—casein基因启动子驱动的人 GDNF 基因乳腺上皮细胞高效特异表达载体，转染人乳腺肿瘤上皮 细胞系 Bcap一37细胞，获得了能够表达重组人 GDNF蛋白的 转基因 Beap一37细胞系，为高效制备与天然人 GDNF蛋白结 构完全一致的重组人GDNF蛋白，并将其用于帕金森病临床 治疗的研究奠定基础。 [18]高梅秀．不同整形和密度对桃树生长和结果的影响[J]．西北 农林科技大学学报：自然科学版，2001，29(z1)：47—49． [19]王安柱．主干形桃树对光截获能力和果实产量品质的影响[J]． 北方果树，2009，26(5)：55． [2o 3朱秀珍，余厚敏，丁士林．树冠光照分布对砂子早生桃果实产量 及品质的影响[J]．安徽农学院学报，1987，14(4)：49—54． [21]何凤梨，王 飞，魏钦平 ，等．桃树冠层相对光照分布与果实产 量品质关系的研究[J]．中国农业科学，2008，41(2)：502—507． [22]李绍华，刘国杰，杜宗绪，等．不同冬季修剪方法对桃树果实生 长、产量及品质的影响[J]．果树科学，1997，14(2)：91—95． [23]宋宏峰，殷守防，马瑞娟．长枝修剪对桃树生长和果实品质的影 响[J]．江西农业学报，2011，23(1O)：79—80． [24]杜宗绪，李绍华 ，张 洪，等．长枝修剪对桃树生育状况的影响 [J]．北方果树，1997(3)：15—17． [25]胡汉升，范宏