转基因生物检测技术简介 (1).pdfVIP

生物 学教 学 ????年?第??卷?第?期? · ?? ·? 转 基 因生物 检 测 技 术 简 介? 张? 芸? ?江苏省苏州工业园区第二高级中学 ???????? 摘 要 在基因工程中 ，目的基因导入受体细胞 后，能否稳定维持和表达其遗传特 性，必须通过检测才 能确定 。本文从 ???、??·? ??、蛋 白质三个层次介绍转基 因生物的检测技术。? 关键词 转基因生物 ???????? 蛋 白质 检测技术? 在基因工程 中，目的基因导人受体 细胞后 ，能否稳? 物中扩 增到 目的基 因 ，而非 转基 因生物 中则扩 增不 出? 定维持和表 达其 遗 传 特性 ，必 须 通过 检 测 才能 确定 。? 目的基 因? 。???具有高度特异性 和灵敏 度 ，已成 为? 转基因生物的检测通常可 以从个体水平 和分子水平两? 转基 因检测的核心 技术并 得到 广泛应用 ，可用 于定性? 个 方面进行。个体 水平 的检测 比较 简单 ，如将抗 虫基? 或定量 分析。定性 ???主要 有标准 ???、巢 式和半 巢? 因导入 棉花叶 肉细胞培 育成 的抗虫 棉 ，要 进行接 种实? 式 ???、多重 ???等 ，定 量 ???主要有竞争定量 ???、? 验 ，即让棉铃虫吃抗 虫棉 的 叶子 ，若棉 铃 虫死亡 ，则证? 实 时荧 光定量 ???、???— ?????等 。? 明抗 虫棉培育成 功 。分 子水平 的检测 则较 为 复杂 ，大? ?．?? ??????? 杂交? 即 ???与 ???分 子之 间 的杂? 体可从 三个层 次进 行 ：检 测 目的基 因是否 插入受 体生? 交 ，操作 方法 是 ：先将受体生物 ???提取出 ，适 当酶切? 物染 色体 ???；检测 目的基 因是否转录 出 ????；检测? 后 ，经琼脂糖 凝胶 电泳 ，将大小 不 同的片段 分 开 ；随后? 目的基 因是否 翻译成 蛋 白质 。本文就从这 三个 层次介? 将凝胶上 的 ???片段转 移至 硝酸纤 维 素膜上 ；接着 ，? 绍转基 因生物的检测技术。? 用放射性 同位 素 ?或 生物 素 ?标 记 的 目的基 因作 探针? ?? 检 测 目的基因是 否插入受体生物染色体 ???? 与硝酸纤维素 膜上 的 ???进行杂交 ；再将 ?光底 片压? ?．?? ???技 术 以少量 受体 生 物 的 ???为模板 ，加? 在硝酸纤维 素膜 上 ，在暗处使 底片感 光 ；最后 ，将 ?光? 人 目的基因特 异性引物 、四种脱 氧核苷 三磷酸 、???酶? 底片 冲洗 ，如果在底 片上 出现黑色条带 ，则 表明受体生? 等 ，通 过变性 、退火 、延伸等反应组成一个周 期 ，循 环多? 物染色体 ???上有 目的基因 【? 。该 法不 仅能检 测 目? 次 ，使 目的基 因得 以大量 扩增 。该 技术 可从 转基 因生? 的基 因是否