哲罗鱼胰岛素样生长因子-II的原核表达与活性分析.pdfVIP

中 国水 产科 学 ????年 ?月，?????：???—???? ???????????????????????????????????? 研 究论 文? ???：??．????／??．?．????．????．?????? 哲 罗鱼胰 岛素样 生长 因子．??的原 核表 达与活性 分析? 吴 秀梅?一，徐 黎 明?，赵 景壮?，刘淼?，曹永 生?，卢彤岩?，尹 家胜? ?．中 国水 产科 学研究 院 黑龙 江水 产研究 所 ，黑龙 江 哈 尔滨 ??????；? ?．上海海 洋大 学 水产 与生命 学 院，上 海 ??????? 摘要 ：在 鱼类胚 胎发 育过 程 中，胰 岛素样 生长 因子 ．??????????—???????????????????—??，???．???起着关 键 的作用 。本 研究? 根据 ??????? 收录 的鲑鳟 鱼 ???．??基 因序列 设计 引 物，以哲 罗鱼??????????????肝 ??? 提取 物为模 板 ，利用? ??．???方法 扩增 出哲罗 鱼 ???．??基 因开放 阅读 框 。将 目的基 因 ???．??与原核 表达 载体 ????? 连接构 建 出重组? 表达 载体 ?????．???。将该 重组 质粒 转化 到大肠 杆菌 ???????中进行 目的蛋 白的诱 导表 达 。???．????电泳分 析? 显示 ，约 在 ?????处含 有 清晰 的条带 ，与 预期结 果相符 ；目的蛋 白以包涵体 形式 存在 。对包 涵体进 行变性／复性后 获? 得较 纯 的 目的蛋 白，利用 ????? 和 ???方法 对 目的蛋 白进行 免疫 学活性 及生 物学 活性分 析 。????? 结果 显示 该? 目的蛋 白能够 与商 品化 的抗鲑 鳟鱼 ???．??的抗体 发生 特异性 反应 ，并 且呈 现抗原 浓度依 赖性 ，该结 果说 明本研 究? 获得 了具有 良好 免疫 原性 的 ???．??蛋 白；???方 法测 定 ???．??蛋 白对鲤 ???????????????????皮细 胞?????????????? ?????????????????，????和虹 鳟 ?????????????????????性 腺 细 胞????????????????????，??????的增 殖效 果 来 鉴定? ???．??蛋 白的生 物学 活性 ，结果 显示所 表 达的哲 罗鱼 ???．??蛋 白能够 有效 的刺激 ???细胞 和 ???．?细胞 增殖 。该? 结 果表 明利 用原 核表 达系统 获得 的哲 罗鱼 ???—??蛋 白具 有 良好 的生 物学 活性 。本研 究为哲 罗鱼 的生 长模式 和生长? 繁 殖 的研究奠 定 了基 础 。? 关 键词 ：胰 岛素样生 长 因子．??；哲 罗鱼 ；生 物活性 ；???? 中图分 类号 ：????；?????? 文献 标志码 ：?? 文章编 号：????—????一????????—????—??? 胰 岛素样生长 因子????????—???????????????????? 中 ???—??含量显著升高，???．??能诱导鱼类