多糖分离纯化剖析.pptVIP

柱层析在多糖分子量分布测定的应用方案细节;柱层析技术(chromatography) ;柱层析测定多糖分子分布量原理;案例分析：;高效凝胶色谱法测定多花黄精多糖分子量与分子量分布;操作流程;操作流程;操作流程;高效凝胶色谱法测定云芝多糖的分子量及其分布;1. 云芝多糖的纯化 取云芝多糖原料约5 g，加水25 ml，微热振摇使溶饵，用Sevage法去蛋白，即加入等量氯仿一正丁醇(4：1)充分振摇，离心，弃下层凝胶样物，取上层溶液同法处理，直至下层溶液不再出现凝胶样物质。取上层溶液加入4倍体积的无水乙醇，振摇，离心，弃溶液，取沉淀物，加水10 ml振摇使溶解，再加入4倍体积的无水乙醇，振摇，离心，同法处理两次。取沉淀60~C减压干燥4 h，取干燥物研细，备用。 ;2. 色谱条件 色谱柱：TSK—GEL G3000PWxl，TSK—GEL Gurad PWxl；流动相：0．05 mol／L Na2SOd[ (含0．05 NaN。)，流速：0．6 ml／min；检测器衰减：1／4，检测器温度25¨C(由RM6超级恒温水浴循环水控制)；数据采集时间：22 min。 ;3. 测定方法 取纯化后的样品以流动相制成10 mg／ml溶液，取右旋糖苷分子量对照品以流动相制成5 mg／ml溶液，分别用0．5 gm微孔滤膜过滤，各取20 l注入色谱仪。 4.标准曲线 取重均