第21章基因诊断与基因治疗第二十一章.pptVIP

第 二 十 一 章;基因(gene);基因变异致病类型;第 一 节; ;（三）、特点 针对性强 特异性高 灵敏度高 适用性强，诊断范围广 ;二、 基因诊断常用技术方法;（一）、核酸分子杂交(molecular hybridization)技术; 探针是能够同某种待研究的核酸序列或蛋白多肽链特异结合的任何分子，经标记之后可用来检测目的DNA/RNA 或蛋白质分子。 实验流程：提取DNA→(限制酶切)→凝胶电泳→膜转移→杂交→放射自显影→分析;建立在核酸杂交技术基础上的常用基因诊断方法;1、限制性内切酶酶谱分析法;×;+;2、DNA-RFLP分析法 ;RFLP分析法;3、ASO杂交法;ASO杂交法;（二）、聚合酶链反应 (polymerase chain reaction, PCR);5?;Cycle 3;2、常用的PCR方法： 常规PCR、巢式PCR、多重PCR、多种PCR、不对称PCR、反转录PCR、定量反转录PCR、mRNA差异显示PCR、原位PCR、实时PCR等等。;3??在PCR技术基础上的常用基因诊断方法; SSCP是指相同长度的单链DNA因其碱基序列不同，甚至单个碱基不同，都可能形成不同的空间构象，从而在中性聚丙烯酰胺凝胶电泳时泳动速率不同的现象。 ;PCR-SSCP分析;正常人;（三）、基因测序(gene sequencing);（四）、基因芯片（gene chip);;基因芯片的应用;（五）、DNA指纹(DNA fingerprint); 简言之：DNA指纹或遗传指纹是指采用“小卫星”基因探针进行DNA分子杂交（ Southern 印迹，Southern blotting）所得的图谱。 实验流程：提取DNA→限制酶切→凝胶电泳→膜转移→杂交→放射自显影→分析;三、基因诊断的应用;总结;复习题;第 二 节;（一）、基因治疗的概念 早期是指用正常的基因整合入细胞基因组，以校正和置换致病基因的一种治疗方法。 ;（二）、基因治疗的基本方法 1、基因矫正 (gene correction) 2、基因置换 (gene replacement) 3、基因增补 (gene augmentation) 4、基因失活 (gene inactivation) ; 1、基因矫正 (gene correction) 指将致病基因的异常碱基进行纠正，而正常部分予以保留。 纳米钳;A G C T G T G A A G T C G T G T C G A C A C T T C A G C A C;2、基因置换 (gene replacement) 指用正常的基因通过体内基因同源重组，原位替换致病基因，使细胞内的DNA完全恢复正常状态。 ;A G C T G T G C A A G T C G T G T C G A C A C G T T C A G C A C;3、基因增补 (gene augmentation) 将目的基因导入病变细胞或其他细胞，不去除异常基因，而是通过目的基因的非定点整合，使其表达产物弥补缺陷基因的功能或使原有基因表达增强。;A G C T G T G C A A G T C G T G T C G A C A C G T T C A G C A C;4、基因失活 (gene inactivation) 指将特定的序列导入细胞后，在转录或翻译水平阻断某些基因的异常表达，已达到治疗疾病的目的。;几种常见的基因失活技术;①反义(antisence)核酸技术;反义RNA技术;T C G A C A C A T T C A G C A C A G C T G T G T A A G T C G T G;②核酶(ribozyme)技术;5’;③三链技术(triplex approach);复制、转录;④干扰RNA(interference RNA,RNAi)技术;dsRNA;RNAi技术的特点;⑤肽核酸(peptide nucleic acid,PNA)技术;肽;⑥基因敲除(gene knock-out)技术;（三）、基因治疗的其他方法;2、基因疫苗的应用 将编码外源性抗原的基因插入到含真核表达系统的质粒上，然后将质粒直接导入人或动物体内，让其在宿主细胞内表达抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答。;重组表达质粒;二、基因治疗的基本程序;; 常见基因载体的优缺点 载体