毕赤酵母直接基因敲除方法的研究 (1).pdfVIP

第 ??卷第?期? 惠州学院学报 ?自然科 学版?? ???．??．??．?? ????年 ??月? ?????????????????????????????? ????．????? 毕赤酵母直接基 因敲除方法的研究? 李莉玲? ?广东惠州 卫生职业技术学院 药学系 ，广 东 惠州 ???????? 摘 要 ：甲醇 营养 型巴斯德 毕赤酵母 已被 广泛应用于外 源蛋 白的表 达 ，但是 作为一个外 源蛋 白表 达 系统 ，其还? 有待进一步 完善 。进一 步提 高外源蛋 白的表达量 以及形成折 叠正确的 目的蛋 白，成为 了改造毕赤 酵母 菌株 的一个? 热点 。基 因缺 失，是一个常 用的改造和 构建新的毕赤酵母重组 菌株 常用的方法。 巴斯德毕赤 酵母 直接 基 因缺失方? 法主要分 为两类 ：有标记 的插入 替换和无标记的 ???—??／???—???。本文 系统地介绍 了这 两种方法 ，分别比较 了各 自? 的优缺点 ，为它们在 巴斯德毕赤酵母 中进 行基因敲除提供 了一定参考 意义? 关键 词 ：巴斯德毕赤酵母 ；基 因缺 失；反向筛选标记 ；???—??／???—???；???—????? 中图分类号 ：???．?? 文献标识码 ：?? 文章编号 ：????— ????????????— ????— ??? 巴斯德毕赤酵 母?????????????????是 ??世纪 ??年代初期发展起来 的一种新型 的外源蛋 白表 达系统 ，在生物表? 达 系统 中研 究最为广泛 。巴斯德毕赤酵母具 有易于高密度 发酵 、培养基成本低 、外源基 因整合稳定 、外 源蛋 白以? 分泌 蛋 白形 式存 在 、内生蛋 白较 少 ，以及 蛋 白翻译后真核 加工等优点 。该 系统相 较其他表达系统 而言 ，弥补 了大? 肠杆菌表达 系统不易表达复杂蛋 白的限制 以及植物 、动物细胞表达系统周期长 、操作繁琐 、成本高 的缺点 ，完善 了? 酿酒酵母 ??????????????????????????分 泌效 率低 、表达菌株 不够稳定 、表达质粒 易丢失等缺 陷 ，迅速成 为各 国科学? 工作者 的研究热点 。? 但是人们也发 现 了巴斯德毕赤 酵母外 源表达 系统 的不足。在表达外源蛋 白时 ，巴斯德毕赤 酵母 重组菌往往? 存 在 比较严重 的蛋 白降解 现象 。酵母 表达外 源糖蛋 白时会对蛋 白进 行过度 ?一糖基 化修饰 ，产生高甘 露糖型糖? 链 ，影 响蛋 白的活性 ，从而 限制 了巴斯德毕赤酵母表达人源型蛋? 白表达在 医药方 面的应用 。随着 ????年 巴斯德毕 赤酵母 全基? 凶组测序和 注释工作 的完成 ，人们对影响其转录调控 、表达调控? 及 翻译后修饰 等机 理有 了进一 步的 了解 ，可以通过相关 基因 的? 敲除达到影响表 达蛋 白途径 ，从而实现改 良的毕赤酵母重 组菌? 的构建 。?